Informacija

Grybo augimo anomalija bulvių dekstrozės sultinyje... vienoje kolboje drumstumo nesimato

Grybo augimo anomalija bulvių dekstrozės sultinyje... vienoje kolboje drumstumo nesimato


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Skiepijau šešias 200 ml bulvių dekstrozės sultinio kolbas, iš kurių viena nemato drumstumo, o terpė skaidri su grybelio disku.

Visi buvo inokuliuoti tuo pačiu metu ir iš tos pačios grynos grybų kultūros.

Kokia gali būti šios anomalijos priežastis?


Galimi keli paaiškinimai. Žinojimas, su kokio tipo grybeliu dirbate ir kaip tiksliai pasėjote kultūras, gali padėti susiaurinti galimybes.

Štai keletas galimų paaiškinimų:

  • Kadangi pasėjote šešias skystąsias kultūras iš tos pačios pradinės kultūros, procesas galėjo būti per ilgas. Leisk man paaiškinti. Dauguma grybų yra griežtai aerobiniai ir netoleruoja net trumpo deguonies trūkumo. Taigi, kaip galiu spėti, kol vieną po kito skiepijote dekstrozės sultinius, sultinio kultūra tiesiog liko neaeruota ant jūsų stalo. Kadangi viską paruošti ir pradėti skiepyti gali prireikti kelių dešimčių minučių, gali būti, kad tai darant grybų fiziologinė būklė tiesiog blogėjo iki tiek, kad įvyko vienas iš paskutinių skiepų. nėra pakankamai gyvybingų ląstelių, kad sultinyje būtų pradėtas augimas.
  • Galbūt pamiršote pakratyti pradinę kultūrą prieš pat imdami mėginį, naudojamą sultiniui pasėti. Taigi gali būti, kad visa pradinėje kultūroje esanti biomasė buvo nusodinta, o jūs ką tik užtepėte sultinį su supernatentu.
  • Be to, klasikinė klaida yra sumaišyti kai kuriuos sultinius. Manote, kad sultiniu pasėjote visus šešis sultinius, bet galbūt netyčia vieną praleidote, o gal du kartus pasėjote tą patį sultinį.

Grybo augimo anomalija bulvių dekstrozės sultinyje... drumstumas nesimato vienoje kolboje - Biologija

Šiuo tyrimu siekiama apibūdinti apibūdinimą Paenibacillus polymyxa GBR-1 (GBR-1), atsižvelgiant į jo teigiamą ir neigiamą poveikį augalams.

Metodai

GBR-1 morfologinės charakteristikos buvo identifikuotos mikroskopu ir identifikavimui buvo atlikta biologinė analizė. Bakterijų populiacija ir terpės optimizavimas buvo nulemtas augimo kreivės. Įvertintas GBR-1, kaip augimą skatinančios medžiagos, antagonistinio aktyvumo ir hidrolizinio aktyvumo skirtingose ​​temperatūrose potencialas. Buvo įvertintas GBR-1 inokuliavimas su kitais mikroorganizmais ir jo patogeniškumas įvairiems laikomiems augalams, įskaitant ženšenį.

Rezultatai

Kolonijų morfologija, endosporas turinčios ląstelės ir GBR-1 ląstelių dalijimasis buvo identifikuoti mikroskopu. Identifikavimas atliktas naudojant Biolog sistemą, riebalų rūgščių metilo esterių dujų chromatografiją (GC-FAME). GBR-1 parodė stipriausią antagonistinį aktyvumą prieš grybelinius ir bakterinius patogenus. GBR-1 ląstelių skaičius buvo santykinai didesnis, kai ląstelės buvo kultivuojamos smegenų širdies infuzijos (BHI) terpėje, palyginti su kitomis terpėmis. Be to, krakmolo hidroliziniam aktyvumui GBR-1 turėjo įtakos aukštesnėje temperatūroje, palyginti su žema temperatūra. GBR-1 buvo patogeniškas kai kuriems saugykloms. GBR-1 kartu su kitais patogenais sukelia puvimo skirtumus ant ženšenio šaknų. Pastebėtas reikšmingas augimo skatinimas tabako sodinukams, apdorotiems GBR-1 suspensijomis in vitro sąlygos, o tai rodo, kad jo lakieji organiniai junginiai (LOJ) gali turėti įtakos augimo skatinimui.

Išvada

Šio tyrimo rezultatai rodo, kad GBR-1 turi ir teigiamą, ir neigiamą poveikį ženšenio šaknims ir kitiems saugomiems augalams, kaip galimas biologinės kontrolės agentas ir sukeliantis poveikį. in vitro augimo skatinimas.


In vitro augimas ir mikrociklų susiliejimas Idriella bolleyi, grūdų patogenų biokontrolės agentas

Minimalūs maistinių medžiagų reikalavimai augimui Idriella (= Mikrodochiumas) bolleyi suplaktoje skystoje kultūroje buvo mineralinės druskos, nitratinis azotas, gliukozė ir tiaminas. Šioje terpėje buvo rodoma tipinė paketinių kultūrų kinetika ir buvo įvertinta pagal kultūros drumstumą, kai natrio alginatas buvo naudojamas dispersinių grybienos augimui paskatinti. Konidijos buvo pagamintos eksponentinio augimo metu ir pasiekė maksimalų skaičių (maždaug 6 × 10 7 ml −1 ) pagal lėtėjimo arba ankstyvos nejudančios fazės. Taikant Monod lygtį kultūros parametrams esant skirtingoms gliukozės koncentracijoms, apskaičiuota, kad minimalus padvigubėjimo laikas gliukozės-nitrato-tiamino terpėje 25 °C temperatūroje yra nuo 5,25 iki 6,1 val. Ks (ribinė substrato koncentracija esant pusei didžiausio specifinio augimo greičio) buvo nuo 0,049 iki 0,077% gliukozės.

Konidijų daigumas priklausė nuo deguonies, tačiau jam nereikėjo maistinių medžiagų. Ant vandens agaro arba 0,1 % gliukozės agaro dauguma sporų sudygo gemalo vamzdeliais, tačiau iki 15 % sporų išsipūtė ir iš vieno ar abiejų pirminės sporos polių gamino tolesnes konidijas (2–5). Ši mikrociklo konidacija buvo slopinama esant didesniam gliukozės kiekiui. Išvados aptariamos atsižvelgiant į biokontrolės inokuliatų gamybą ir efektyvumą I. bolleyi biokontrolėje ant šaknų.

Dabartinis adresas: Benaki Phytopatological Institute, Ekalis 2, 145 61 Kiphissia, Atėnai, Graikija.


Anotacija

Šiame tyrime numatoma biologinė sidabro nanodalelių gamyba naudojant Fusarium oxysporum ir in-silico nanodalelių antibakterinio aktyvumo nustatymas naudojant baltymų ir ligandų sąveikos tyrimus. Nanodalelių morfologija buvo kintama, dauguma jų buvo sferinės 1–50 nm dydžio diapazone. Dėl in-silico tyrimai, du mikroorganizmai, Escherichia coli ir Pseudomonas aeruginosa buvo atrinkti ir metalinis prijungimas atliktas naudojant licencijuotą programinę įrangą SYBYL X 1.1.1. Ligandas giliai pritvirtintas prie abiejų išorinės membranos baltymų (OMP) surišimo kišenių E. coli ir P. aeruginosa. Rezultatai parodė, kad sidabras gali būti stiprus antibakterinis agentas prieš abu patogenus, o sidabro antibakterinis poveikis yra stipresnis P. aeruginosa. Rezultatai, gauti per in-silico tyrimus toliau patvirtino in vitro metodus tiek kietoje, tiek skystoje terpėje, kad patvirtintų rezultatus, gautus naudojant in-silico analizė. Patvirtinimas in-silico ir in vitro rezultatai puikiai parodo didžiulį sidabro nanodalelių antibakterinį potencialą prieš pasirinktus patogenus.


Didelio našumo flokuliantą gaminančių bakterijų atranka ir kviečių distiliavimo gamyklos nuotekų flokuliacijos sąlygų optimizavimas

Šiuo tyrimu buvo siekiama ištirti didelio efektyvumo flokuliatorius gaminančias bakterijas, kad būtų galima flokuliuoti suspenduotas medžiagas kviečių distiliavimo gamyklos nuotekose. Po pirminio ir antrinio patikrinimo iš kviečių distiliavimo gamyklos nuotekų aktyviojo dumblo buvo atrinkta didelio efektyvumo flokuliantą gaminanti bakterijų padermė. Vieno faktoriaus ir stačiakampiai eksperimentai buvo naudojami siekiant optimizuoti flokuliantą gaminančių bakterijų kultūrą ir flokuliavimo sąlygas. Aukščiausia padermė Klebsiella M1 buvo patikrintas ir identifikuotas 16S rDNR. Pradinis flokuliacijos laipsnis buvo iki 72%. Remiantis vieno faktoriaus bandymais, optimalios flokuliavimo sąlygos buvo 30 min. ramybės laikas, 8 % (v/v) auginimo terpės dozė ir 3 % (t/t) CaCl2. Optimalios auginimo sąlygos buvo inkubavimo temperatūra 30 °C 48 valandas esant pH 4,5 ir sukimosi greitis 150 aps./min. Optimaliomis sąlygomis flokuliacijos laipsnis siekė iki 82%. Geriausi fermentacijos terpės komponentai buvo 15 g/l gliukozės, 2 g/l peptono, 1 g/l KH2PO4 ir 2,5 g/l K2HPO4. Aukštas flokuliacijos laipsnis taip pat buvo pasiektas naudojant pigią terpę. Klebsiella M1 bakterijų štamas gali būti naudojamas kaip geras bioflokuliantas, gaminantis bakterijas kviečių distiliavimo gamyklų nuotekoms.

Visas straipsnis

Didelio našumo flokuliantą gaminančių bakterijų atranka ir kviečių distiliavimo gamyklos nuotekų flokuliacijos sąlygų optimizavimas

Huan Diao, a, b Lvmu Li, a, c, * Jun Liang, a ir Xiaoling Ding c

Šiuo tyrimu buvo siekiama ištirti didelio efektyvumo flokuliatorius gaminančias bakterijas, kad būtų galima flokuliuoti suspenduotas medžiagas kviečių distiliavimo gamyklos nuotekose. Po pirminio ir antrinio patikrinimo iš kviečių distiliavimo gamyklos nuotekų aktyviojo dumblo buvo atrinkta didelio efektyvumo flokuliantą gaminanti bakterijų padermė. Vieno faktoriaus ir stačiakampiai eksperimentai buvo naudojami siekiant optimizuoti flokuliantą gaminančių bakterijų kultūrą ir flokuliavimo sąlygas. Aukščiausia padermė Klebsiella M1 buvo patikrintas ir identifikuotas 16S rDNR. Pradinis flokuliacijos laipsnis buvo iki 72%. Remiantis vieno faktoriaus bandymais, optimalios flokuliavimo sąlygos buvo 30 min. ramybės laikas, 8 % (v/v) auginimo terpės dozė ir 3 % (v/v) CaCl.2. Optimalios auginimo sąlygos buvo inkubavimo temperatūra 30 °C 48 valandas, kai pH 4,5, ir sukimosi greitis 150 aps./min. Optimaliomis sąlygomis flokuliacijos laipsnis siekė iki 82%. Geriausi fermentacijos terpės komponentai buvo 15 g/l gliukozės, 2 g/l peptono, 1 g/l KH.2PO4ir 2,5 g/l K2HPO4. Aukštas flokuliacijos laipsnis taip pat buvo pasiektas naudojant pigią terpę. The Klebsiella M1 bakterijų štamas gali būti naudojamas kaip geras bioflokuliantas, gaminamas kviečių distiliavimo gamyklų nuotekoms.

Raktiniai žodžiai: Bioflokuliantai Bioresursai Kviečių distiliavimo gamyklų nuotekos Klebsiella spp. Atrankos optimizavimas

Kontaktinė informacija: a: Gyvybės ir mokslų mokykla, Anhui žemės ūkio universitetas, Hefėjus, Anhui, 230036, Kinija b: Farmacijos mokykla, Anhui Xinhua universitetas, Hefėjus Anhui, 230088, Kinija c: Anhui žemės ūkio universiteto gyvūnų mokslų ir technologijų mokykla , Hefėjus, Anhui, 230036, Kinija

* Autorius susirašinėti: [email protected]

ĮVADAS

Anhui Ruifuxiang Food Co. Ltd yra didžiausia įmonė Kinijoje, gaminanti alkoholį iš kviečių. Kasdien išleidžiama apie 3000 tonų nuotekų. Cheminio deguonies poreikio koncentracija nuotekose yra iki 50 000 mg/l. Suspenduotų kietųjų dalelių (SS) kiekis yra beveik 10 000 mg/l, o bendrojo azoto koncentracija – apie 1000 mg/l. Pagrindiniai SS komponentai yra nuo 6 % iki 7 % bendro suspenduotų kietųjų dalelių, maždaug 3 % baltymų, nuo 1,5 % iki 2,5 % pentozano ir nuo 2 % iki 3 % mielių, kurių pH nuo 3,2 iki 4. Kai kurios nuotekų savybės yra aukšta temperatūra, didelis rūgštingumas, didelė koncentracija, didelis klampumas ir nedidelis suspenduotų dalelių skaičius. Šiuo metu ši įmonė daugiausia naudoja cheminius flokuliatorius, tokius kaip poliakrilamidas (PAM), kurie nuotekoms valyti yra derinami su plūduriavimu ore ir anaerobine fermentacija. Naudojamas PAM kiekis yra maždaug nuo 10 ppm iki 15 ppm, o valymo flokuliantu kaina yra maždaug 0,2 juanio už toną nuotekų. PAM gydymo efektas yra efektyvesnis nei kitų cheminių flokuliatorių. Tačiau likęs akrilamido monomeras yra neurotoksinas, kuris gali sukelti neurotoksiškumą, o vėžiu paveiktiems asmenims gali pasireikšti silpnumo ir ataksijos simptomai (Yokoi ir kt. 1997 Rudén 2004). Todėl būtina sukurti saugų ir efektyvų žaliąjį flokuliantą, kuris nekeltų antrinės taršos. Dėl mikrobinių flokuliantų (bioflokuliantų) nekenksmingumo, didelio efektyvumo ir ekologiškumo aplinkai nekenksmingo pobūdžio jie sulaukė didelio mokslinių tyrimų bendruomenės susidomėjimo (Liu ir kt. 2013). Bioflokuliantai, gaunami fermentuojant su bakterijomis ar grybais unikaliomis auginimo sąlygomis, ekstrahuojant ir rafinuojant, yra medžiagų apykaitos produktas, kurį gamina mikroorganizmai arba jų sekretai. Bioflokuliantas susideda iš polimerų, pasižyminčių flokuliavimo aktyvumu, kuris gali susijungti su teršalais nuotekose ir tada generuoti nuosėdas, kurios turi būti filtruojamos (Vijayalakshmi ir Raichur, 2003). Dauguma tyrimų parodė, kad pagrindiniai bioflokulianto komponentai yra polisacharidai ir baltymai (Liu ir kt. 2009). Dauguma jų yra polisacharidai (Luo ir kt. 2014). Bioflokuliantai buvo naudojami daugelio rūšių nuotekoms, tokioms kaip maistas, spausdinimas ir dažymas, mineralai ir pienas, valyti (Wang ir kt. 2007 Okaiyeto ir kt. 2015). Tačiau mikrobų flokuliuojančių bakterijų tyrimas flokuliuojančių kviečių distiliavimo gamyklų nuotekose nebuvo atliktas. Kadangi bakterijų flokuliacijos gebėjimas gali rodyti didelį specifiškumą įvairių tipų nuotekoms, būtina atsižvelgti į įvairias flokuliatorius gaminančias bakterijas. (Agunbiade ir kt. 2017 Li ir kt. 2017). Atrinktos didelio našumo flokuliantą gaminančios bakterijų padermės, kad iš kviečių distiliavimo gamyklų nuotekų, kurios buvo pasirinktos kaip žaliava, būtų gaminamas bioflokuliantas, optimizuotos flokuliacijos ir kultivavimo sąlygos, siekiant sukurti itin efektyvų žaliųjų kviečių distiliavimo nuotekų valymo procesą.

Bioflokuliantų gamybai ir flokuliaciniam aktyvumui įtakos turi daug veiksnių, tokių kaip auginimo terpės sudėtis, bakterijų auginimo sąlygos ir flokuliavimo sąlygos (Luo ir kt. 2014). Minėtų sąlygų optimizavimas yra naudingas bioflokulianto flokuliuojančiam poveikiui. Kurane ir kt. (1986) pranešė, kad kai optimali auginimo temperatūra buvo 30 ℃, bioflokuliantų kiekis ir ląstelių augimas buvo du kartus didesnis nei esant 25 ℃ ir 37 ℃. Kai pradinė pH vertė buvo 9,5, ląstelių augimo greitis buvo didesnis nei esant 7 pH. Zhao ir Liu (2008) parodė, kad esant optimalioms auginimo sąlygoms (pH = 12, auginimo temperatūra = 30 ℃, sukimosi greitis = 150 aps./min. ir inkubacijos laikas = 74 val.), bioflokulianto kiekis buvo didžiausias, iki 95,0%, o tai buvo didesnis nei kontrolinės grupės). Yang ir kt. (2009) parodė, kad pridėtas bioflokulianto kiekis, pH, koagulianto pagalba (CaCl2), o maišymo greitis turi didelės įtakos flokuliacijos laipsniui. Anglies, azoto ir neorganinės druskos yra pagrindiniai veiksniai, lemiantys auginimo terpės kainą. Optimalių anglies ir azoto šaltinių ir geriausio fosfatų santykio gavimas flokuliuojančių bakterijų kultūroje turi įtakos ląstelių augimui, bioflokulianto gamybai ir sumažina auginimo terpės kainą (Chen). ir kt. 2013 Murthy ir Praveen 2013 Zhao ir kt. 2013b).

Šis tyrimas optimizavo įprastas auginimo sąlygas, anglies šaltinį, azoto šaltinį ir fosfatų santykį. Optimalus anglies šaltinis buvo nustatytas naudojant gliukozę, sacharozę, laktozę, maltozę ir krakmolą. Optimalus azoto šaltinis buvo nustatytas naudojant vieną arba kelis azoto derinius iš jautienos ekstrakto, natrio nitrato, karbamido, amonio sulfato ir peptono. Optimali neorganinio fosfato dozė buvo gauta nustačius geriausią kalio-divandenilio fosfato (KH) santykį2PO4) ir kalio vandenilio fosfatas (K.2HPO4).

EKSPERIMENTAS

Padermės ir auginimo terpės išskyrimo šaltinis

Anhui Ruifuxiang Food Co. Ltd (HeFei City, Anhui provincija, Kinija) pateikė alkoholio daryklos likučius ir aktyvųjį dumblą, kurie buvo naudojami atrankos medžiagoms.

Fermentacijos terpę sudarė 20 g gliukozės (Aladdin Industrial Corporation, Šanchajus, Kinija), 0,5 g mielių ekstrakto (Beijing AOBOX Biotechnology Corporation, Pekinas, Kinija), 5,0 g K.2HPO4 (Xilong Scientific Corporation, Guangdong, Kinija), 2,0 g KH2PO4 (Xilong Scientific Corporation, Guangdong, Kinija), 0,2 g MgSO4 (Aladdin Industrial Corporation, Šanchajus, Kinija), 0,1 g NaCl (Hangzhou Microbial Reagent Co., LTD, Hangdžou, Kinija), 0,1 g amonio sulfato (Aladdin Industrial Corporation, Šanchajus, Kinija) ir 0,5 g karbamido (Xilong) Mokslinė korporacija, Guangdong, Kinija).

Bakterijų auginimo terpėje (pieno rūgšties bakterijų auginimo terpė: MRS) buvo 10,0 g peptono (Aladdin Industrial Corporation, Šanchajus, Kinija), 10,0 g jautienos ekstrakto (Hangzhou Microbial Reagent Co., LTD, Hangdžou, Kinija), 5,0 g mielių ekstraktas (Pekino AOBOX Biotechnology Corporation, Pekinas, Kinija), 2,0 g citrinų rūgšties diamonio vandenilio (Xilong Scientific Corporation, Guangdong, Kinija), 20,0 g gliukozės (Aladdin Industrial Corporation, Šanchajus, Kinija), 1,0 ml Tween 80 ( Tianjin Zhiyuan Chemical Reagents Co., Ltd., polioksietileno (20) sorbitano monooleatas), 5,0 g natrio acetato (Xilong Scientific Corporation, Guangdong, Kinija), 2,0 g K2HPO4· 3H2O (Xilong Scientific Corporation, Guangdong, Kinija), 0,58 g MgSO4· 7H2O (Xilong Scientific Corporation, Guangdong, Kinija), 0,25 g MnSO4· H2O (Xilong Scientific Corporation, Guangdong, Kinija) ir 18,0 g agaro (Hangzhou Microbial Reagent Co., LTD, Hangdžou, Kinija). PH buvo nuo 6,2 iki 6,6.

Bakterijų auginimo terpėje (Nutrient Broth:NB) buvo 5 g jautienos ekstrakto (Hangzhou Microbial Reagent Co., LTD, Hangdžou, Kinija), 5 g natrio chlorido (Xilong Scientific Corporation, Guangdong, Kinija) ir 10 g peptono (Aladdin Industrial Corporation, Šanchajus, Kinija) ir turėjo neutralų pH.

Grybų auginimo terpę (bulvių dekstrozės agaro terpė: PDA) sudarė 200 g bulvių (Supermarket, Hefėjus, Kinija), 20 g gliukozės (Aladdin Industrial Corporation, Šanchajus, Kinija) ir maždaug nuo 15 g iki 20 g agaro. (Hangzhou Microbial Reagent Co., LTD, Hangzhou, Kinija) ir turėjo neutralų pH.

Flokuliantą gaminančių bakterijų atranka

Preliminari atranka: iš kviečių alkoholio gamybos įmonės buvo paimti 1 g aktyviojo dumblo ir 1 g alkoholio distiliuotojo likučių mėginiai ir įpilami į aseptinį distiliuotą vandenį su keliais sterilizuotais stiklo rutuliais, kad bakterijų mikroląsteles išsklaidytų į atskiras ląsteles. Į 99 ml skystos MRS, NB ir PDA sodrinimo terpės buvo pridėta 1 ml pavienių ląstelių suspensijos ir inkubuojama atitinkamai 30 °C ir 37 °C temperatūroje, sukant 150 aps./min., 48 valandas. Skysta terpė praskiedžiama distiliuotu vandeniu. Petri lėkštelės su grybeliu ir bakterijų atskyrimo agaro terpėmis buvo padengtos 0,1 ml praskiesto skysčio. Atskyrimo terpė buvo kultivuojama 48 valandas ir buvo stebimos kolonijos savybės. Lygios, didelės ir lipnios kolonijos buvo atrinktos ir išgrynintos naudojant dryžių plokštelių techniką (Guo 2013). Atrinktos padermės buvo laikomos šaldytuve 4 ° C temperatūroje.

Antrinė atranka: gautos iš pirminio patikrinimo kamienai buvo inokuliuojamos 100 ml etaloninio fermentacijos terpėje ir kultivuojamos atitinkamo patikrinimo instrukcijų temperatūros ir sukimosi greitis 150 aps./min 24 h. Flokuliuojančios medžiagos efektyvumas buvo matuojamas tiriant kviečių distiliavimo gamyklos nuotekų flokuliacijos laipsnį (Yang ir kt. 2015), tada buvo atrinktos didelio efektyvumo mikrobų flokuliantus gaminančios padermės.

Rūšių identifikavimas pagal molekulinę biologiją

Ekranuotos bakterinės kamienai buvo sekvenuotos 16S rDNR. Grunto sintezė ir sekos darbas buvo baigtas Sangon Biotech Co., Ltd (Šanchajus, Kinija). Remiantis sekvenuotais 16S rDNR rezultatais, nukleotidų seka buvo BLAST suderinta su NCBI duomenų baze ir buvo identifikuotos patikrintos rūšys. Kai kurių padermių 16S rDNR genų seka buvo išskirta iš Genbank, o filogenetinis padermės medis buvo nubrėžtas naudojant NJ metodą MEGA 4 programinėje įrangoje (Evolutionary Functional Genomics Biodesign Institute, Arizonos valstijos universitetas, Tempe, AZ, JAV) .

Penkios–šešios šakos buvo užpildytos 6 ml šviežios terpės, kad būtų suformuota šlaito kultūra, ir kuo daugiau padermių buvo padengtas visame šlaite, skirtas derliaus padermėms. Supakuotos bakterijos buvo išsiųstos į Kinijos tipo kultūros rinkimo centrą (Uhanas, Kinija) išsaugoti.

Padermės augimo kreivės nustatymas

Išgrynintas kamienas buvo inokuliuojamas į 150 ml mitybinės terpės, ir sugeriamumo vertė, esant 600 nm bangos ilgiui (OT600) buvo išmatuotas. Kultūros sultinio pH, biomasė ir OD600 vertės buvo nustatytos esant 37 °C atrankos temperatūrai ir pastoviam 150 aps./min. sukimosi greičiui. Mėginiai buvo renkami kas 6 val. Neinokuliuota terpė buvo naudojama kaip kontrolinė grupė. Augimo kreivė buvo nubrėžta su kultivavimo laiku kaip abscisė ir OD600 reikšmė kaip ordinatė (Xing ir kt. 2010).

Flokuliacijos laipsnio nustatymas

Flokuliacijos aktyvumas buvo nustatytas matuojant kviečių distiliavimo gamyklos nuotekų flokuliacijos laipsnį. Flokuliacijos laipsnio nustatymo metodas: į trikampes kolbas su 100 ml kviečių distiliavimo gamyklos nuotekų įpilama 5 ml kultūrinio sultinio maišymui kambario temperatūroje. Trikampė kolba buvo greitai virpama 3 minutes (120 aps./min.), lėtai svyravo 2 minutes (50 aps./min.), o po to 10 min. Galiausiai, supernatantas buvo surinktas, kad būtų galima išmatuoti absorbcijos vertę (OD780). Vietoj kultūrinio sultinio kaip kontrolinė grupė buvo naudojamas distiliuotas vanduo. Nuotekų flokuliacijos laipsnis buvo apskaičiuotas pagal šią lygtį (Li ir kt. 2017),

2 pav. M1 padermės augimo ir pH kreivės

Vieno faktoriaus flokuliavimo sąlygų optimizavimas

Vieno faktoriaus testo rezultatai parodė, kad buvo didesnis flokuliacijos laipsnis ir ilgesnis poilsio laikas. Tačiau, flokulianto laipsnis nebuvo pastebimai pakeistas, skirta atsiremti laiko mažiau nei 30 min. Pagal bandymo efektyvumo, optimalus poilsio laikas buvo nustatyta, kad 30-oji min. Rezultatai parodyta pav. 3. ilsisi laikas tyrimas parodė, kad gumulus laipsnis buvo padidintas išplečiant ramybės laiką, dėl ilgą laiką ramybės suteikia daug galimybių dalelių nuotekų sustabdymo kaupti ir padidino Veliamosios laipsnį rezultatai ( al-Shamrani ir kt. 2002).

6 pav. Flokuliuojančių veikliųjų medžiagų pasiskirstymas M1 padermėje. Vertės parodo vidurkius ir standartinius nuokrypius, n=3 Stulpelio su skirtingais viršutiniais indeksais reikšmės labai skiriasi (p<0,01).

Kultūros sąlygų optimizavimas

Vieno veiksnio auginimo sąlygų optimizavimas

Su Kultūra laiko padidėjimas, flokulianto laipsnis M1 bakterijų palaipsniui didinama.

7 pav. Kultūros laiko įtaka flokuliacijos laipsniui. Vertės parodo vidurkius ir standartinius nuokrypius, n=3.

Kai inkubacijos laikas pasiekė 48 valandas, kultūrinio tirpalo flokuliavimosi laipsnis su kviečių distiliavimo gamyklos nuotekomis buvo iki 74,6%. Šis rezultatas parodytas 7 pav. Rezultatai parodė, kad bioflokuliantas buvo M1, o ne ląstelių autolizės (Lu) biosintezės produktas. ir kt. 2005). Kai flokuliacijos aktyvumas pasiekė maksimumą, flokuliacijos aktyvumas turėjo mažėjimo tendenciją. Tai gali būti susiję su flokulantu skilti fermentacijos sultinio, arba maistinių medžiagų, reikalingų vėlesniuose mikroorganizmų trūkumą (Li ir kt. 2007).

Iš 8 pav. matyti, kad flokuliacijos laipsnis padidėjo pirmuoju temperatūros didinimo žingsniu (25 °C iki 30 °C), o vėliau buvo linkęs mažėti, kai temperatūra buvo toliau didinama. Kviečių distiliavimo gamyklos nuotekų flokuliacijos laipsnis 30 °C temperatūroje buvo palyginti aukštas, beveik 75,5%. Flokuliacijos laipsnis sumažėjo, kai auginimo temperatūra buvo aukštesnė nei 37 °C. Kultūros temperatūra turi įtakos ne tik mikrobų augimui ir metabolizmui, bet ir fermentų aktyvumui mikrobų ląstelėse (Zhang ir kt. 2002). Aukšta temperatūra lemia padermės fermento aktyvumo sumažėjimą ar net praradimą, o tai turi įtakos padermių augimui ir metabolizmui bei sukelia žemą padermės M1 fermentacijos skysčio flokuliacijos laipsnį. Dėl žemos temperatūros lėtėja padermės augimas ir sumažėja fermento aktyvumas in vivoir netgi sumažina flokuliatorių ir kitų metabolitų kiekį. Taip pailgėja flokuliacinės medžiagos sintezės ir kaupimosi laikas.

8 pav. Poveikis kultūros temperatūrą flokulianto laipsnį. Vertės reiškia vidurkį ir standartinius nuokrypius, n=3.

Ortogonalinio eksperimento optimizavimo rezultatai auginimo sąlygomis

Pagal 5 lentelėje pateiktą verčių diapazoną, didžiausią įtaką flokuliacijos laipsniui įtakojančių veiksnių tvarka buvo tokia: A > D > B > C. Optimalios auginimo sąlygos buvo A2, B2, C.1, ir D2, t.y., Kultūra laikas 48 val, kultūra temperatūra 30 ° C, fermentacija pH 5, ir sukimosi greitis 150 aps./min. Pagal šias sąlygas flokuliacijos laipsnis siekė iki 82,0%, o didžiausias ortogonalinio patikrinimo testo rezultatas buvo maždaug 81,8%. Ortogonalinio eksperimento rezultatai parodė, kad auginimo temperatūros įtaka flokuliacijos laipsniui buvo didžiausia.

Vidutinės optimizavimo rezultatai

Vieno veiksnio optimizavimo eksperimentas

Anglies šaltinis vaidina svarbų vaidmenį ląstelių augimo ir sintezės metabolitų. Įvairūs anglies šaltiniai turėjo skirtingas įtakas ant Veliamosios laipsnio bakterijų. 11 paveiksle parodyta, kad laktozės, maltozės ir krakmolo, kaip anglies šaltinių, įtaka M1 bakterijų gamybai buvo tokia pati, o sacharozė ir gliukozė turėjo didesnį poveikį nei kiti anglies šaltiniai. Flokulianto laipsnis gliukozės grupės buvo didžiausias po iš sacharozės grupės. Anglies šaltinis yra svarbiausias mikroorganizmų maistinių medžiagų šaltinis ir svarbus citoskeleto formavimosi elementas. Anglies šaltinis yra svarbus terpės komponentas. Pigūs anglies šaltiniai gali veiksmingai sumažinti išlaidas. Esant tokiam pat poveikiui, pigesnis anglies šaltinis yra geresnis. Šiame eksperimente gliukozė ir sacharozė buvo panašios kainos, o gliukozė buvo pasirinkta tolesniems eksperimentams, nes ji palaikė šiek tiek aukštesnį bioflokuliacijos laipsnį. Todėl buvo nuspręsta, kad gliukozė yra geriausias M1 padermės anglies šaltinis.

7 lentelė. Anglies šaltinio, azoto šaltinio ir fosfatų santykio M1 kultūros terpėje stačiakampių bandymų dispersijos analizės lentelė

IŠVADOS

  1. Labai veiksmingos flokuliantą gaminančios bakterijos, Klebsiella M1, buvo atrinktas nuo aktyviojo dumblo ir gali būti naudojamas kaip didelio našumo bioflokuliantą gaminanti bakterija kviečių distiliavimo gamyklų nuotekoms. Pradinis flokuliacijos laipsnis buvo iki 72,1%. Padermė buvo saugoma Kinijos centre, skirta tipiškų kultūrų kolekcijai, o numeris buvo CCTCCM 2018098. 16S rDNR genas buvo užregistruotas GenBank ir jo prisijungimo numeris buvo MG987011.
  2. Pagal vieną faktoriaus eksperimento, optimalus gumulinių sąlygas buvo ramybės būsenoje laikas 30 min, 8% kultūros terpė dozė, ir 3% CaCl2.
  3. Optimalios kultūros sąlygų M1 bakterijų buvo kultūra laikas 48 val, kultūra temperatūra 30 ° C, pradinė pH 4,5, ir sukimosi greitis 150 aps./min. Po patikros testo flokuliacijos laipsnis pasiekė 82,0%. Stačiakampė optimizavimo rezultatai parodė, kad optimalus kultūros terpė iš M1 bakterijų esančius gliukozės kaip anglies šaltinio (15 g / l), leptono, kaip vienintelio azoto šaltinio (2 g / L), ir fosfato dozės santykis 1 g / L KH2PO4 iki 2,5 g/l K2HPO4. Aukštas flokuliacijos laipsnis buvo pasiektas naudojant nebrangią terpę.
  4. Šie eksperimentai parodė, kad M1 padermė gali būti naudojama kaip gera bioflokuliantų padermė kviečių distiliavimo gamyklų nuotekoms. Sukurtas naujas metodas kviečių distiliavimo gamyklų nuotekoms valyti bioflokuliantais.

PADĖKA

Šis tyrimas buvo paremtas dotacija iš Anhui tyrimų ir plėtros programos (1704a07020064).

CITUOTA NUORODOS

Agunbiade, M. O., Van Heerden, E., Pohl, C. H. ir Ashafa, A. T. (2017). „Bioflokulianto, pagaminto iš Arthrobacter humicola nuotekų valymo srityje“, BMC Biotechnol. 17, 51. DOI: 10.1186/s12896-017-0375-0

Al-Shamrani, A. A., James, A. ir Xiao, H. (2002). "Alyvos-vandens emulsijų destabilizavimas ir atskyrimas ištirpusio oro flotacija" Water Res. 36, 1503-1512. DOI: 10.1016/S0043-1354(01)00347

Chai, X.-L., Chen, J. ir Wang, M. (2000). „Bioflokulianto valymas ir naudojimas“, Pramoninis vandens valymas 20(6), 23-25.

Chen, X.-F., Huang, C., Yang, X.-Y., Xiong, L., Chen, X.-D. ir Ma, L.-L. (2013). „Įvertinant terpės sudėties ir fermentacijos sąlygų įtaką mikrobų aliejaus gamybai pagal Trichosporon cutaneum ant kukurūzų rūgšties hidrolizato“, Bioresource Technol. 143, 18-24. DOI: 10.1016/j.biortech.2013.05.102

GB/T 11901-89 (1989). „Vandens kokybės skendinčios medžiagos nustatymas gravimetriniu metodu“, Kinijos standartizacijos administracija, Pekinas, Kinija.

GB/T 11914-89 (1989). „Cheminio deguonies poreikio vandens kokybei nustatymas dichromato metodu“, Kinijos standartizacijos administracija, Pekinas, Kinija.

GB/T 7488-87 (1987). "Biocheminio penkių dienų deguonies suvartojimas (BDS5) vandens kokybės", standartizacijos administracijos Kinijoje, Pekine, Kinijoje.

Guo J. J. (2013). Kiaulių nuotekų valymas naudojant bioflokuliaciją ir adsorbciją su chemiškai modifikuotu ceolitu, Ph.D. Disertacija, Hunano universitetas, Čangša, Kinija.

Guo, J., Lau, A. K., Zhang, Y. ir Zhao, J. (2015). „Bulvių krakmolo nuotekų bioflokulianto apibūdinimas ir flokuliacijos mechanizmas“ Appl. Microbiol. Biot. 99(14), 5855-5861. DOI: 10.1007/s00253-015-6589-y

Ho, Y. C., Norli, I., Alkarkhi, A. F. ir Morad, N. (2010). „Biopolimerinio flokulianto (pektino) ir organinio sintetinio flokulianto (PAM) apibūdinimas: lyginamasis kaolino suspensijos apdorojimo ir optimizavimo tyrimas. Bioresursų technologija 101, 1166-1174. DOI: 10.1016/j.biortech.2009.09.064

Kurane, R., Toeda, K., Takeda, K. ir Suzuki, T. (1986). „Mikrobinio flokulianto gamybos kultūros sąlygos Rhodococcus erythropolis,” Agr. Biol. Chem. Tokijas 50(9), 2309-2313. DOI: 10,1080 / 00021369.1986.10867747

Li, J., Yun, Y.-q., Xing, L., ir Lyrinės, L. (2017). "Nauji bioflocculant gaminamas druskos tolerantiškas, alkaliphilic kamienas Oceanobacillus polygoni HG6 ir jo taikymas rauginimo nuotekų valymui. Biosci. Biotech. Bioch. 81(5), 1018-1025. DOI: 10,1080 / 09168451.2016.1274635

Li, X., li, X. M., ir Yang, L. (2007). „Bilflokuliantą gaminančios padermės ir jos flokuliavimo charakteristikų patikrinimas“ Biotechnologija 33(1), 33-37.

Li, W., Zhou, W., Zhang, Y., Wang, J. ir Zhu, V. (2008). „Eksopolisacharido iš giliavandenės psichrofilinės bakterijos flokuliacijos elgesys ir mechanizmas Pseudoalteromonassp. SM9913“, Bioresursų technologija 99(15), 6893-6899. DOI: 10.1080/02772240802590277

Liu, Z.-y., Hu, Z.-q., Wang, T., Chen, Y.-y., Zhang, J., Yu, J.-r., Zhang, T., Zhang, Y .-f. ir Li, Y.-l. (2013). „Naujų mikrobų flokuliatorių gamyba pagal Klebsiella sp. TG-1 naudojant maisto pramonės atliekų likučius ir jų naudojimą tronos suspensijos tuštinimui. Bioresource Technol. 139, 265-271. DOI: 10.1016/j.biortech.2013.03.165

Lu, W. Y., Zhang, T., Zhang, D. Y., Li, C. H., Wen, J. P. ir Du, L. X. (2005). „Naujas bioflokuliantas, kurį gamina Enterobacter aerogenes ir jo naudojimas tronos suspensijos tuštinimui. Biochem. Inž. J. 27, 1-7. DOI: 10.1016/j.bej.2005.04.026

Luo, Z., Chen, L., Chen, C., Zhang, W., Liu, M., Han, Y. ir Zhou, J. (2014). „Bioflokulianto gamyba ir savybės pagal Klebsiella pneumoniae YZ-6, išskirtas iš žmogaus seilių. Appl. Biochem. Biotech. 172(3), 1282-1292. DOI: 10.1007/s12010-013-0601-8

Murthy H. N. ir Praveen N. (2013). „Anglies šaltiniai ir vidutinis pH turi įtakos augimui Withania somnifera (L.) Dunal atsitiktinės šaknys ir withanolido A gamyba“, Gamtos produktų tyrimas 27(2), 185-189. DOI: 10.1080/14786419.2012.660691

Okaiyeto, K., Nwodo, U. U., Mabinya, L. V. ir Okoh, A. I. (2015). “Bacillus toyonensis AEMREG6 padermė, bakterija, išskirta iš Pietų Afrikos jūros aplinkos nuosėdų mėginių, gamina glikoproteinų bioflokuliantą. Molekulės 20(3), 5239-5259. DOI: 10,3390 / molekulės20035239

Pang, C., Li, A., Cui, D., Yang, J., Ma, F. ir Guo, H. (2016). „Visa genomo seka Klebsiella pneumoniae J1, baltymų pagrindu mikrobų flokuliantas gaminančios bakterijos, " J. Biotechnol. 220, 90-91. DOI: 10.1016/j.jbiotec.2016.01.020

Rudén, C. (2004). „Akrilamido ir vėžio rizika – ekspertų rizikos vertinimai ir viešos diskusijos“, Food Chem. Toxicol. 42(3), 335-349. DOI: 10.1016/j.fct.2003.10.017

Sekelwa, C., Anthony, U. M., Vuyani, M. L. ir Anthony, O. I. (2013). “ Termostabilaus polisacharidinio bioflokulianto, pagaminto Virgibacillus rūšys, išskirtos iš Algoa įlankos“, Afr. J. Microbiol. Res. 7(23), 2925-2938. DOI: 10.5897 / AJMR12.2371

Vijayalakshmi, S. P. ir Raichur, A. M. (2003). „Naudingumas Bacillus subtilisas bioflokuliantas smulkioms anglims“, Colloids Surf, B 29, 265-270. DOI:10.1016/S0927-7765(03)00005-5.

Wang, S. G., Gong, W.-X., Liu, X. W., Tian, ​​L., Yue, Q. Y. ir Gao, B. Y. (2007). „Naujo bioflokulianto gamyba kultivuojant Klebsiella mobilis naudojant pieno nuotekas ", Biochem. Inž. J. 36(2), 81-86. DOI: 10.1016/j.bej.2007.02.003

Xing J. Yang J. Ma F. Wang, W., Liu, K. (2010). „Flokuliantus gaminančios bakterijos F2 augimo charakteristikos ir fermentacijos kinetika“, Lekt. N. Bioinformat. 6330, 691-699. DOI: 10.1007/978-3-642-15615-1_81

Jonas D. F. (2013). Mikroorganizmų pagaminto bioflokulianto, naudojant bulvių krakmolo nuotekas, būklės optimizavimo ir flokuliacijos mechanizmo analizė, magistro baigiamasis darbas, Gansu žemės ūkio universitetas, Landžou, Kinija.

Jonas M., Liang, J., Dou Y. Jia, X, Che, H. (2015). „Bioflokuliantus gaminančios padermės išskyrimas ir identifikavimas bei kultūrinių sąlygų optimizavimas per atsako paviršiaus modelis “, Chem. Ecol. 31(7), 650-660. DOI: 10,1080 / 02757540.2015.1075516

Yang, Z.-H., Huang, J., Zeng, G.-M., Ruan, M., Zhou, C.-S., Li, L. ir Rong, Z.-G. (2009). "Kaolino suspensijos flokuliacijos sąlygų optimizavimas naudojant sudėtinį MBFGA1 ir PAC flokuliatorių pagal atsako paviršiaus metodiką" Bioresource Technol. 100(18), 4233-4239. DOI: 10.1016/j.biortech.2008.12.033

Zhao, C., Yang, Q. ir Zhang, H. (2017). „Mikrobų flokuliatorių gaminančios terpės optimizavimas Bacillus subtilis,” Indijos J. Microbiol. 57 (1), 83-91. DOI: 10.1007/s12088-016-0631-3

Zhao, H., Liu, H. ir Zhou, J. (2013a). „Bioflokulianto MBF-5 apibūdinimas pagal Klebsiella pneumoniae ir jo taikymas pašalinant Acanthamoeba cistas“, Bioresursas. Techn. 137, 226-232. DOI: 10.2166/washdev.2014.181

Zhao, J. ir Liu, C. (2008). „Mikrobų flokuliantą gaminančios bakterijos atranka ir kultūros būklės optimizavimas“: 2 d Tarptautinė bioinformatikos ir biomedicinos inžinerijos konferencija, Šanchajus, Kinija, p. 4409-4412.

Zhao, L., Fan, F., Wang, P. ir Jiang, X. (2013b). „Naujo bakterinio tarpląstelinio polisacharido, turinčio puikų drėgmę sulaikantį aktyvumą, kultūros terpės optimizavimas“ Appl. Biochem. Biotech. 97(7), 2841-2850. DOI: 10.1007/s00253-012-4515-0

Zhang, J., Liu, Z., Wang, S. ir Jiang, P. (2002). "Apibūdinimo bioflocculant gaminamas jūrų myxobacterium Nannocystis sp. NU-2 “ Taikomoji mikrobiologija ir biotechnologija 59(4/5), 517-522. DOI: 10.1643/CE-08-012

Zheng, Y., Ye, Z. L., Fang, X. L., Li, Y. H. ir Cai, W. M. (2008). „Bioflokulianto, pagaminto pagal Bacilos sp. F19“, Bioresursų technologija 99, 7686-7691. DOI:10.1016/j.biortech.2008.01.068

Straipsnis pateiktas: 2018 m. gegužės 7 d. Tarpusavio vertinimas baigtas: 2018 m. liepos 17 d. Patikslinta versija gauta: 2018 m. rugpjūčio 15 d. Priimta: 2018 m. rugpjūčio 16 d. Paskelbta 2018 m. rugpjūčio 27 d.


Grybo augimo anomalija bulvių dekstrozės sultinyje... drumstumas nesimato vienoje kolboje - Biologija

Laboratorinės procedūros mikroorganizmams

Kultūros terpės paruošimas ir laikymas

Atsargumo priemonės – dehidratuota terpė
Šviesa
Drėgmė
Temperatūra ir laikas

Dehidratuotos terpės paruošimas
Dehidratuotos terpės atkūrimas
Kultūrinių terpių sterilizavimas
Sterilizacijos patikrinimas
Perkaitimo poveikis
Lentelėje gedimus ir galimas priežastis media sterilizacija

Paruošimas sterilizuoti laikmenų

Paruoštos terpės laikymas

Paruoštos terpės naudojimo ir šalinimo atsargumo priemonės

Atsargumo priemonės – dehidratuota terpė

Vartotojo-laboratoriniai paruoštų terpių kokybės kontrolės testai

Kultūrinės terpės turi būti laikomos nurodytoje temperatūroje, nustatytomis sąlygomis ir ne ilgiau nei kiekvienam produktui tinkamas tinkamumo laikas. Kiekvieno gaminio laikymo sąlygos ir galiojimo laikas yra nurodyti etiketėse arba gaminio lapeliuose, tačiau šios bendrosios taisyklės padės užtikrinti, kad jie būtų laikomi optimalioje aplinkoje. Laikant produktus atkreipkite dėmesį į galiojimo laiką galiojimo pabaigos datas ant etikečių ir naudoti produktus, kad jų daug / partijos numerius.

Visos paruoštos auginimo terpės ir jų komponentai turi būti laikomi atokiau nuo šviesos ir visada turi būti vengiama tiesioginių saulės spindulių.

Įprasta laboratorinė drėgmė neveikia sandarių stiklinių ir plastikinių indų. Atidarytos dehidratuotų miltelių talpyklos bus paveiktos didelės drėgmės. Karštos, garuojančios terpės paruošimo patalpos netinka aplinkai, kurioje galima laikyti kultūros terpės konteinerius, ypač talpyklas, kurios dažnai atidaromos ir uždaromos. Pageidautina saugoti gretima šaldymo patalpa arba tinkama sandėliavimo spinta.

Kultūrinių terpių ir jų komponentų laikymo temperatūros sąlygos labai skiriasi. Toliau pateiktos produktų grupės padės atskirti įvairius reikalavimus.

Kultūros terpė: sandariai uždarytos, neatidarytos talpyklos turi būti laikomos kambario temperatūroje 15-20°C. Atidarytos talpyklos dangtelis arba dangtelis turi būti atsargiai ir patikimai uždėti. Svarbu, kad atidarytos talpyklos būtų laikomos sausoje atmosferoje kambario temperatūroje. Tinkamumo laikas nuo 1 iki 5 metų.

Paruošta sultinio terpė: Laikyti 2–8 °C temperatūroje. Neleiskite gaminiams užšalti. Tinkamumo laikas nuo 6 mėnesių iki 2 metų.

Paruoštos kultūros terpės lėkštelės: Supiltos agaro terpės lėkštelės yra ypač pažeidžiamos infekcijoms, dehidratacijai ir cheminiam skilimui. Aseptinis paruošimas ir laikymas yra būtini norint apsaugoti plokšteles nuo mikrobinės infekcijos. Vandens nuostolius sandėliuojant galima sumažinti nepralaidžia vyniojimo medžiaga ir (arba) laikant 2–8 ° C temperatūroje. Cheminis skilimas pvz. oksidacijos ar antimikrobinių medžiagų praradimo, gali būti sulėtina apsauga nuo šviesos, karščio ir dehidratacijos.

Tačiau svarbu stebėti paruoštų plokštelių laikymą atliekant kokybės kontrolės testus, kad būtų galima nustatyti bet kokį gedimą ir tiksliai nustatyti laikymo trukmę. Paprasti šviežių ir saugomų lėkščių svėrimo testai nustatys drėgmės praradimo greitį. Svorio netekimas didesnis nei 5 % reiškia didelį vandens netekimą.

Dujų generavimo rinkiniai: Laikyti 2–8°C temperatūroje sausoje vietoje. Nelaikykite šių rinkinių aukštesnėje temperatūroje ilgą laiką. Tinkamumo laikas 3 metai.

Sterilūs reagentai: laikykite 2–8 °C temperatūroje, išskyrus arklių serumą nuo -20 iki +8 °C.

Jautrumo diskai: Laikyti -20 °C temperatūroje, bet darbines medžiagas laikyti 2–8 °C temperatūroje. Tinkamumo laikas nuo 1 iki 2 metų.

Dehidratuotos terpės paruošimas

Dehidratuotos terpės yra higroskopinės ir jautrios drėgmei, karščiui ir šviesai. Jas neigiamai veikia drastiški temperatūros pokyčiai pvz. karšta/šalta važiavimo dviračiu temperatūra, kuri žiemą gali būti tarp dienos ir nakties laboratorinių temperatūrų.

Laikymo sąlygos paprastai nurodomos gaminio etiketėje ir jų reikia laikytis.

1 Etiketėje užrašykite gavimo laboratorijoje datą.

2 Laikyti, kaip nurodyta etiketėje, paprastai žemesnėje nei 25°C temperatūroje sausoje vietoje, atokiau nuo tiesioginių saulės spindulių, autoklavų, džiovinimo krosnių ar kitų šilumos šaltinių.

3 Patikrinkite etiketės galiojimo datą, kai kurių laikmenų galiojimo laikas yra žymiai trumpesnis nei kitų.

4 Naudokite atsargas partijos / partijos numerio tvarka. Neatidarykite naujo buteliuko, kol ankstesnis butelis neištuštės. Ant etiketės atkreipkite dėmesį į pirmą kartą atidarytos talpyklės datą. Po naudojimo įsitikinkite, kad talpykla sandariai uždaryta, ir grąžinkite ją į tam skirtą saugojimo vietą.

5 Užsisakykite terpę tinkamo dydžio talpykloje ir tokiu kiekiu, kuris atitinka įprasto naudojimo reikalavimus. Terpė didelėje talpykloje, kuri buvo daug kartų atidaryta, sandėliuojant sugenda. Išmeskite terpę, jei milteliai nesilieja laisvai, spalva pasikeitė arba ji kažkaip atrodo nenormali.

Dehidratuotos terpės atkūrimas

Išsamios auginimo terpės paruošimo instrukcijos pateiktos kiekvieno buteliuko etiketėje. Paprastai protinga paruošti tik vienos savaitės poreikį.

1 Visada naudokite šviežiai paruoštą distiliuotą arba dejonizuotą vandenį. Norėdami pagreitinti terpės tirpimą, naudokite šiltą (50 °C) vandenį. Išskalaukite visus stiklinius indus distiliuotu/dejonizuotu vandeniu ir įsitikinkite, kad indai yra švarūs ir be toksiškų cheminių medžiagų, kurios gali susigerti ant stiklo paviršiaus, pvz. tulžies druskos, teluritas, selenitas ir kt.

2 Paruoškite terpę inde, kurio tūris yra maždaug dvigubai didesnis už galutinį terpės tūrį, kad būtų galima tinkamai susimaišyti. Laikykitės nurodymų, pateiktų kiekvieno gaminio etiketėje.

3 Atidarykite auginimo terpės talpyklą toliau nuo skersvėjų ir drėgmės. Venkite įkvėpti miltelių ir ilgalaikio sąlyčio su oda. Greitai, tiksliai pasverkite miltelius ir nesudarydami „dulkių debesų“. Kuo greičiau vėl uždarykite talpyklą. Į indą supilkite pusę reikiamo distiliuoto vandens tūrio, tada pasvertą terpės kiekį ir keletą minučių intensyviai maišykite. Likusį distiliuotą vandenį supilkite į indo šonus, kad bet kokia prilipusi terpė vėl išplautų į tirpalą. Tai svarbus žingsnis, nes sausos auginimo terpės milteliai virš vandens lygio gali būti nesterilizuojami autoklave ir gali būti užteršimo šaltinis.

Terpė be agaro paprastai ištirpsta švelniai maišant. Terpė, kurioje yra agaro, turi būti pakaitinta, kad agaras ištirptų prieš autoklavavimą. Užvirinkite terpę, kad ji nesudegtų ir nesudegtų. Daugumą auginimo terpių reikės galutinai sterilizuoti autoklave 121 °C temperatūroje 20 minučių.

Gamintojas sureguliavo dehidratuotos terpės pH taip, kad galutinis paruoštos terpės pH atitiktų etiketėje pateiktą specifikaciją, kai terpė buvo atvėsinta iki 25°C. Prieš sterilizuodami nereguliuokite dehidratuotos terpės pH.

Kultūrinių terpių sterilizavimas

Nors auginimo terpę geriausia sterilizuoti garų autoklave esant 121–134°C temperatūrai, reikia pripažinti, kad kaitinimo procesas padaro žalą terpei.

Termiškai apdorojant sudėtingas auginimo terpes, kuriose yra peptidų, cukrų, mineralų ir metalų, maistinės medžiagos sunaikinamos tiesiogiai termiškai skaidant arba reaguojant tarp terpės komponentų.

Chemooksidacijos sukeltų toksiškų produktų gali susidaryti ir termiškai apdorojant. Todėl svarbu optimizuoti kaitinimo procesą, kad po kaitinimo terpė būtų sterili, tačiau terpės sudedamosios dalys būtų kuo mažiau pažeistos. Paprastai pripažįstama, kad trumpalaikiai aukštos temperatūros procesai yra mirtingesni organizmams ir mažiau chemiškai žalingi nei ilgesni, žemesnės temperatūros procesai, pvz. Pageidautina 3 minutes 134 °C temperatūroje, o ne 20 minučių 115 °C temperatūroje.

Bendra instrukcija, kaip sterilizuoti terpę iki vieno litro 121 °C temperatūroje 20 minučių, yra ant kiekvienos etiketės. Tačiau autoklavų našumas skiriasi, todėl norint nustatyti įkaitimo ir atvėsimo laiką, reikia atlikti termoporos bandymus, naudojant skirtingus terpės tūrius. Tai bus būtina padaryti, kai ruošiamas didesnis nei dviejų litrų terpės tūris. Siekiant išvengti didelio tūrio terpės vienetų perkaitimo, „įkaitinimo“ ir „atšalimo“ laikotarpiai paprastai integruojami į 121 °C laikymo laiką.

Sterilizacijos ciklą galima suskirstyti į keturis etapus:

1 etapas 20–121 °C Kameros įkaitimo laikas

Kameros įkaitimo laikas priklauso nuo autoklavo efektyvumo (oro išleidimo/garų tiekimo) ir apkrovos kameroje dydžio. Šiam etapui reikalingas laikas matuojamas įrašymo zondu, esančiu oro išleidimo vožtuve, esančiame kameros apačioje.

2 pakopa <100–121 °C Vidutinės talpos šilumos įsiskverbimo laikas

Šilumos prasiskverbimo laikas daugiausia priklauso nuo atskirų talpyklų tūrio, nors indų forma ir šilumos perdavimo savybės gali turėti įtakos šiam etapui. Laikas, kurio reikia, kad terpės tūris pasiektų 121 ° C, matuojamas termoporais, esančiais vidinio indo centre.

Tūris (ml) stikliniuose buteliuose Laikas (min.)

Šiuo metu daroma prielaida, kad agaro terpė buvo ištirpinta prieš dedant autoklave. Taip pat daroma prielaida, kad galimas didžiausias garų poveikis. Taigi, nors vienam 100 ml buteliukui pasiekti 121 °C prireikė 12 minučių, įdėtas į dėžę su kitais buteliais prireikė 19 minučių, o įdėjus į sukrautų dėžių centrą – 30 minučių.

3 etapas 121–121 °C Laikymo laikas nurodytoje temperatūroje

Laikymo laikas 121 °C temperatūroje priklauso nuo (i) organizmų, iš pradžių esančių terpėje, skaičiaus (ii) dalinio organizmo skaičiaus, kuris, kaip manoma, yra po kaitinimo, pvz. N = 0,001, atitinkantis vieną butelį iš 1000 pašildytų butelių, kurie užsiteršia (iii) tariamo organizmo, esančio 121 °C temperatūroje, terminės mirties konstanta.

Rekomenduojamas laikymo laikas yra:

Temperatūra ( C) ⎡ ⎦ ⎮

4 etapas 121–80 °C Atvėsimo laikas, kol kamera pasiekia 80 °C

Atvėsinimo laikas priklauso nuo kameroje esančios apkrovos dydžio ir šilumos nuostolių iš autoklavo greičio. Vandens purškalai naudojami siekiant pagreitinti aušinimą komerciniuose sterilizatoriuose, tačiau reikia labai atidžiai kontroliuoti, kad butelis nesulūžtų ir aušinimo purškalas nepatektų į sterilizuotą terpę. Pastaroji problema atsiranda, kai aušinimo metu galvos erdvėje susidaręs vakuumas siurbia užterštą aušinimo skystį dangtelio sriegiu ir į butelį.

Kultivavimo terpės autoklavai turi būti nelaikyti ir turėti tik vidutinės kameros talpos. Šiluminiai durų užraktai turėtų neleisti joms atsidaryti, kai kameros temperatūra yra aukštesnė nei 8°C, tačiau net ir tokiomis aplinkybėmis, išimant stiklinius karšto skysčio butelius iš autoklavo, reikia vengti staigaus šiluminio šoko. Kai į autoklavą dedami indai su užsukamu dangteliu, dangteliai turi būti laisvi iki pusės apsisukimo, kad galėtų išeiti įkaitęs oras. Išėmus iš autoklavo konteinerius reikia leisti atvėsti laminarinėje oro srauto spintelėje. Arba užsukamais dangteliais talpyklas galima sterilizuoti indelyje, uždengtame veltinio gabalėliu, kuris veiksmingai apsaugo indus nuo užkrėtimo oru plintančiais mikroorganizmais. Turiniui atvėsus iki aplinkos temperatūros, dangteliai sandariai užsukami.

Visi autoklavai turi būti tikrinami nustatytu laiku, siekiant užtikrinti, kad jie veiktų efektyviai. Turėtų būti atliekami fiziniai temperatūros ir slėgio matavimai, patikrinta garų kokybė, nustatytas „beveik garui“ esančių oro gaudyklių efektyvumas autoklavo pagrinde ir patikrinti apsauginiai vožtuvai. Privalomas autoklavų, kaip slėginių indų, patikras paprastai kasmet atlieka specialistai pagal tokių aparatų draudikų nurodymus. Mažuose laboratoriniuose autoklavuose šis patikrinimas nėra privalomas.

Cheminiai indikatoriai parodys pasiektą arba viršytą temperatūrą, o kai kurie – laiką, išlaikytą nurodytoje temperatūroje. Nepakankamas autoklavavimas paprastai yra savaime aiškus, nes nesugebėjimas sunaikinti visų natūraliai dehidratuotoje terpėje esančių bakterijų sporų ("bionašta") leis augti saugomoje arba inkubuotoje terpėje. Sterilizacijos nesėkmė visada turėtų būti įtariama, kai paruošta terpė užteršta kenksmingais organizmais. Biologiniai sterilizavimo rodikliai parodys autoklavo gebėjimą sunaikinti bakterijų sporas.

Perkaitimas yra dažna pH nukrypimo, tamsėjimo, kritulių, prasto gelio stiprumo ir sumažėjusio bakteriologinio veikimo priežastis. Šie efektai taip pat gali atsirasti, jei indo dugne esantis koncentruotas ingredientų „baseinas“ yra šildomas. Prieš sterilizavimą visos auginimo terpės turi būti tirpale. Tai sumažins terpėje vykstančių Maillard tipo reakcijų (ne fermentinio rudumo) atsiradimą.

Perkaitimo efektas atsiras, jei agaro terpėms bus leista sutirštėti buteliuose ir vėliau garuosite, kad agaras ištirptų. Jų taip pat atsiras, jei prieš naudojimą išlydyta terpė bus laikoma 50 °C temperatūroje ilgiau nei 3 valandas. Agaro terpės, kurių pH yra 5,0 arba mažesnės, yra labai jautrios bet kokios formos perkaitimui, nes agaras hidrolizuojasi ir gelio stiprumas sumažėja. Žemesnio nei 5,0 pH terpės agarą rekomenduojama sterilizuoti atskirai.

Dauguma sunkumų, kylančių sterilizuojant auginimo terpę, kyla tada, kai reikia apdoroti didelį vienetą terpės (& gt2 litrų). Geriausias šios problemos sprendimas yra auginimo terpės preparatoriaus naudojimas. Šie pusiau automatiniai procesoriai, pagaminti New Brunswick ir kitų gamintojų, įveikia prasto agaro šilumos prasiskverbimo problemą nuolat maišant arba maišant terpę kaitinimo fazės metu. Tokie preparatai žymiai sumažins sterilizavimo laiką 121 °C temperatūroje arba kai kuriuose modeliuose 134 °C temperatūroje. Jie labai rekomenduojami dėl didelio efektyvumo ir minimalios žalos auginimo terpėms.

Sterilizavimo terpės gedimų ir galimų priežasčių lentelė

pH testas, atliktas aukštesnėje nei 25°C temperatūroje. Perkaitimas dėl ilgo sterilizavimo, perlydymo arba ilgo laikotarpio 50°C temperatūroje. Nepilnas terpės tirpalas. Prastos kokybės vanduo arba indai. Dehidratuota terpė, laikoma netinkamai arba pasibaigus nurodytam tinkamumo laikui.

Prastos kokybės vanduo arba indai. Perkaitimas arba ilgalaikis laikymas 50°C temperatūroje. Netinkama pH vertė. Neišsamus sprendimas.

Perkaitimas, nepilnas tirpalas arba pH poslinkis. Fosfato buvimas be gliukozės ar kitų cukrų ir agaro.

Agaras netirpęs, blogai maišomas, ilgai laikomas 50°C temperatūroje. Perkaitimas esant žemoms pH vertėms. Svėrimo klaida arba per didelis skiedimas inokuliu arba terpės papildais. pH per žemas agarui.

Ilgas ir per didelis kaitinimas, neišsamus sprendimas. Slopinančios medžiagos vandenyje arba talpyklose. Tamsėjimas ir pH pokytis.

Sterilizuotos terpės paruošimas

Skystos terpės, kurios sterilizuojamos galutiniuose induose, turi būti kuo greičiau atvėsintos iki kambario temperatūros. Tada reikia priveržti užsukamuosius dangtelius.

Sterilizuotos agaro terpės talpyklos turi būti dedamos į 50°C vandens vonią ir terpę išpilstyti, kai tik ji pasiekia šią temperatūrą, arba ne ilgiau kaip per 3 valandas vonioje. Terpė turi būti kruopščiai sumaišyta, nesusidaranti burbuliukų, ir aseptiškai išpilstyti į sterilius indus. Nelaikykite agaro terpės lėkštelių nuo saulės spindulių, nes ant dangtelių susidaro per didelis kondensatas ir dėl fotooksidacijos gali susidaryti slopinančios medžiagos.

Karščiui atsparių priedų reikia dėti į terpę, kai ji atšaldoma iki 50°C. Prieš įdėdami į agaro terpę, leiskite steriliam priedui sušilti iki kambario temperatūros. Dėl labai šaltų skysčių agaras gali sustingti arba susidaryti skaidrių dribsnių, kuriuos galima lengvai pamatyti, pvz. krauju praturtintame agare. Švelniai ir kruopščiai sumaišykite visus papildus į terpę, tada kuo greičiau paskirstykite į galutinius indus.

Kraujo agarui ruošti naudojamas kraujas turi būti kuo šviežesnis ir turi būti laikomas 2–8°C temperatūroje (kraujas neturi būti užšaldytas). Pašildykite kraują 35 °C inkubatoriuje, prieš įdėdami į sterilų išlydytą agaro pagrindą, atšaldytą iki 40–45 °C. Norint užtikrinti kraujo vėdinimą, būtina tinkamai sumaišyti dideliame inde. Prastai deguonies prisotintos kraujo plokštelės yra purpurinės spalvos, o tinkamai aeruotas kraujo agaras yra vyšnių raudonumo. Rekomenduojama naudoti defibrinuotą kraują, o ne kraują, kuriame yra antikoaguliantų.

Paruoštos terpės laikymas

Rekomenduojamas paruoštų auginimo terpių tinkamumo laikas labai skiriasi. Butelius su užsukamu dangteliu maistinių medžiagų sultinio ir agaro galima laikyti 6 mėnesius žemoje aplinkos temperatūroje (12–16°C). Svarbu visas laikmenas laikyti atokiau nuo šviesos. Agaro lėkštelės turi būti laikomos 2–8°C temperatūroje sandariuose induose, kad neprarastų drėgmės. NESUŠALDYK.

Šviežia laikmena yra geresnė nei saugoma, todėl venkite ilgo saugojimo laiko. Kai kurių labai labilių selektyvių beta laktamo preparatų veikimo laikas yra labai trumpas, o terpė, kurioje yra tokių medžiagų, turėtų būti panaudota per kelias dienas nuo paruošimo.

Gera laboratorinė praktika yra nustatyti visų paruoštų terpių tinkamumo laiką ir atitinkamai antspauduoti talpyklas ar laikiklius.

Drėgmės praradimas iš agaro plokštelių yra dažna prasto bakteriologinio veikimo priežastis. Neinkubuokite visų plokštelių per naktį, kad būtų patikrintas sterilumas. Tik akivaizdžiai šlapias lėkštes reikia išdžiovinti prieš inokuliaciją.

Užtikrinkite, kad visos plokštelės būtų inkubuojamos drėgnoje aplinkoje.

Prieš inokuliaciją apžiūrėkite paruoštą terpę. Ieškokite užteršimo, netolygaus užpildymo ar burbuliukų ant agaro paviršiaus, spalvos pokyčių, hemolizės ir dehidratacijos požymių, pvz., susitraukimo, įtrūkimų ir tūrio praradimo. Išmeskite visas sugedusias plokštes ar vamzdelius.

Paruoštos terpės naudojimo ir šalinimo atsargumo priemonės

Reikėtų pripažinti, kad tyčia ar netyčia į auginimo terpę įsėjus bakterijomis, susidaro labai daug organizmų. Didelės bet kokių organizmų koncentracijos yra potencialiai pavojingos ir turi būti saugiai pašalintos taikant patvirtintus metodus.

Visus užkrėstus mėginius ir užkrėstą auginimo terpę turėtų tvarkyti tik kvalifikuoti darbuotojai, išmokyti atlikti mikrobiologines procedūras. Tokie darbuotojai turėtų užtikrinti, kad visi jų prižiūrimi mėginiai ir kultūros būtų tinkamai tvarkomi ir galiausiai autoklave prieš išmetimą. Visi naudojami ir užteršti aparatai turi būti saugiai dezinfekuoti arba sterilizuoti. Tai ypač svarbu, kai tokie aparatai turi būti aptarnaujami arba išleidžiami iš laboratorijos.

Taip pat reikia atsižvelgti į aplinką, kurioje tvarkomos mikrobiologinės kultūros. Dauguma šalių turi organizmų kategorijas, kurios skirstomos į tuos, kuriuos galima tvarkyti bendrojoje mikrobiologinėje laboratorijoje, tuos, kuriems reikalingos specialios laboratorinės sąlygos, o pavojingiausiems organizmams reikalinga visiškai uždara ir labai saugoma aplinka. Šių taisyklių ir nuostatų nesilaikymas gali būti baudžiamasis nusikaltimas. Kai naudojate auginimo terpę, prieš inokuliaciją visada pažymėkite arba identifikuokite talpyklą su mėginio detalėmis.

Į terpę pasėkite taikydami aseptinius metodus ir inkubuokite atitinkamomis sąlygomis.

Po inkubacijos apžiūrėkite terpę, ar nėra mikrobų augimo požymių, ir atlikite atitinkamas išskyrimo ir identifikavimo procedūras.

Atsargumo priemonės – dehidratuota terpė

Dauguma tiekiamų produktų neturi žinomos rizikos, išskyrus tuos, kurie paprastai susiję su smulkiais milteliais. Tačiau norint išvengti pavojaus įkvėpti smulkias dulkes, dirbant su dehidratuota medžiaga rekomenduojama dėvėti kaukes. Pasirinkta kaukė turi atitikti Didžiosios Britanijos standartą Nr. 6016. Šiam tikslui tiktų 3M Corporation gaminamos kaukės tipas.

Galimi atskirų gaminių pavojaus duomenų lapai.

Dehidratuotos auginimo terpės, tiekiamos miltelių, granulių ar tablečių pavidalu, neturėtų būti valgomos.Miltelių negalima įkvėpti, nes gali sudirginti viršutinius kvėpavimo takus, ypač vartojant tulžies druskos produktus. Kad išvengtumėte lengvo odos bėrimo, venkite ilgalaikio kontakto su milteliais. Miltelių pavidalo produktai, išsilieję, gali būti sušluoti ir pašalinti įprastu būdu. Bet kokius likučius reikia nuplauti dideliu kiekiu šalto vandens.

Yra keletas produktų, kuriuose yra toksiškų medžiagų, ir su jais reikia elgtis atsargiai.

1 Terpė, kurioje yra talio druskų. Šie produktai pažymėti nuodų etikete.

Talio druskos yra labai toksiškos įkvėpus arba prarijus, todėl kyla kumuliacinio poveikio pavojus. Produktai, kurių sudėtyje yra talio druskų, turi būti laikomi toliau nuo maisto, gėrimų ir gyvūnų pašaro. Dirbdami su milteliais visada dėvėkite kaukę ir pirštines.

2 Terpė, kurioje yra natrio azido

Šiuose produktuose yra mažiau nei 1% natrio azido ir jie yra mažai toksiški. Tačiau kai kurie žmonės turi padidėjusį jautrumą azidui, todėl gali reaguoti atsitiktinai patekę į produktą. Reikia imtis atsargumo priemonių, kad dulkės neprarytų arba neįkvėptų. Visada dėvėkite pirštines, kaukę ir akių apsaugos priemones.

Natrio azidas reaguoja su daugeliu metalų, ypač su variu, ir susidaro sprogūs metalų azidai. Plaunant produktus, kurių sudėtyje yra azidinių pūkinių kriauklių, būtina naudoti pakankamai vandens, kad milteliai nesiliestų su vamzdynais ir latakais. Ta pati atsargumo priemonė taikoma bet kuriam biologiniam tirpalui, kuriame yra natrio azido kaip konservanto.

3 Natrio biselenitas. Šis produktas pažymėtas TOXIC.

Jis yra ėsdinantis patekęs ant odos ir sukelia toksinį poveikį įkvėpus arba prarijus. Teigiamas teratogeninis poveikis.

Šis junginys, paruoštas priedų buteliukuose, pasiekia koncentraciją, kuri laikoma toksiška ir yra atitinkamai paženklinta. Tačiau atskiedus į auginimo terpę, jo koncentracija nukrenta žemiau minimalaus lygio, kuris laikomas pavojingu. Tiriant buteliukus, kuriuose yra toksiško cikloheksimido, svarbu užtikrinti, kad buteliuko tirpalas nepaliestų odos ir kad nesusidarytų aerozoliai, kurie leistų junginį įkvėpti. Naudojant šiuos buteliukus patariama mūvėti apsaugines pirštines ir veido kaukę.

Vartotojo-laboratoriniai paruoštų terpių kokybės kontrolės testai

Kokybės kontrolės bandymus turėtų atlikti galutinio vartotojo laboratorija, siekiant užtikrinti, kad terpės veikimo charakteristikos atitiktų specifikaciją ir ar terpės paruošimo metodika yra patenkinama.

Kiekvienai paruoštos terpės partijai / partijai turi būti taikoma minimali bandymų programa, kuri užtikrins, kad ji yra priimtina ir parodys tipišką bakterijų veikimą.

1 pH vertė : patikrinkite, ar paruoštos terpės pH, kai tiriama galutinė forma aplinkos temperatūroje (25°C), atitinka produkto etiketėje nurodytą diapazoną. Terpė turi būti išmesta, jei pH vertė nepatenka į nurodytą diapazoną.

2 Sterilumas: reprezentatyvus kiekvienos partijos/terpės partijos mėginys turi būti inkubuojamas 2–5 dienas 35–30 °C ir 50–55 °C temperatūroje. Paprastai 100 ar mažiau vienetų partijoje turi būti tiriamas 3–5 % mėginio. Didesnei partijai paimama 10 atsitiktinių plokštelių arba vamzdelių. Po inkubacijos neturėtų būti jokių mikrobų augimo požymių. Baigę tyrimus, išmeskite visus sterilumo mėginius.

3 Augimo efektyvumas : patikrinkite produkto augimą palaikančias savybes, į terpę įterpdami atitinkamas pradines kultūras ir (arba) šviežius izoliatus. Naudokite standartinę inokuliavimo procedūrą ir ištirkite gautus kiekybinius ir kokybinius rezultatus. Jei bandote naujas terpės partijas/partijas, vienu bandymu pasėkite seną ir naują partiją ir palyginkite dviejų partijų veikimą.

4 Stabilumas: periodiškai atlikite aukščiau nurodytas procedūras su saugomomis paruoštomis terpėmis, kad nustatytumėte, ar laikymo sąlygos duos optimalius rezultatus.

PASTABA: Jei terpė neatitinka lūkesčių ir buvo laikomasi visų gamintojų rekomendacijų, reikia imtis šių veiksmų: (1) užrašykite problemos pobūdį ir terpės paruošimo būdą (2) pažymėkite partiją. /partijos numeris ir jo gavimo data (3) skambinkite tiekėjo techninių paslaugų skyriui.

(atgaminta su keliais pakeitimais iš „The Oxoid Manual“, 6-asis leidimas, 1990 m.)

DSMZ, CBS ir BCCM parengtos CABRI gairės, 1998 m. gegužės 17 d.
Puslapio maketas pagal CERDIC
Autorių teisės CABRI, 1998 m

&kopijuoti CABRI konsorciumas 1999–2013 m.
Šio kūrinio negalima atgaminti viso ar jo dalies be aiškaus raštiško CABRI konsorciumo leidimo.
Svetainę prižiūri Paolo Romano. Paskutinį kartą peržiūrėta 2013 m. balandžio mėn.


Nuorodos

Karaman I, Sanin Güllüce, Ogutcu H, Sengul M, Adigüzel A: Antimikrobinis vandens ir metanolio ekstraktų aktyvumas Juniperus oxicedrus. J Etnofarmakolas. 2003, 2837: 1-5.

Fabian AS, Peter DC, Matthew JD, Mathieu P, Dolores M, Lily C, Paul SD: kerpes formuojančių grybų genties veisimosi sistemos Kladonija. Grybelinė Genet Biol. 2005, 42: 554-563. 10.1016/j.fgb.2005.03.006.

Huneck S: kerpių ir jų metabolitų reikšmė. Naturwissenschaften. 1999, 86: 559-570. 10.1007/s001140050676.

Kirmizigül S, Koz O, Anil H, Icli S: Naujų natūralių produktų iš turkiškų kerpių išskyrimas ir struktūros išaiškinimas. Turk J Chem. 2003, 27: 493-500.

Malhotra S, Subban R, Singh A: Kerpių vaidmuo tradicinėje medicinoje ir vaistų atradime. Internetas J Alternative Med. 2008, 5: 2-

Karagoz A, Dogruoz N, Zeybek Z, Aslan A: Kai kurių kerpių ekstraktų antibakterinis aktyvumas. J Med Plants Res. 2009, 3: 1034-1039.

Kosanić M, Ranković B: Antibakterinis ir priešgrybelinis įvairių kerpių ekstraktų ir kerpių rūgšties aktyvumas. Res J Biotechnol. 2011, 6: 23-26.

Tohma HS, Gulcin I: Antioksidacinis ir radikalų šalinimo aktyvumas iš oro dalių ir turkiško saldymedžio (Glycyrrhiza glabra L.) šaknų. Int J Food Prop. 2010, 13: 657-671. 10.1080/10942911003773916.

Ibanez E, Kubatova A, Senorans FJ, Cavero S, Reglero G, Hawthorne SB: Antioksidantų junginių iš rozmarinų augalų subkritinis vandens ekstrahavimas. J Agr Food Chem. 2003, 51: 375-382. 10.1021/jf025878j.

Dorman HJ, Bachmayer O, Kosar M, Hiltunen R: Antioksidacinės savybės vandeninių ekstraktų iš pasirinktų Lamiaceae rūšių, auginamų Turkijoje. J Agr Food Chem. 2004, 52: 762-770. 10.1021/jf034908v.

Talaz O, Gulcin I, Goksu S, Saracoglu N: 5,10-dihidroindeno[1,2-b]indolų, turinčių pakaitų dihidroindeno dalyje, antioksidacinis aktyvumas. Bioorg Med Chem. 2009, 17: 6583-6589. 10.1016/j.bmc.2009.07.077.

Oyaizu M: parudavimo reakcijos produktų, pagamintų iš gliukozamino, tyrimai. Jpn J Nutr. 1986, 44: 307-314. 10.5264/eiyogakuzashi.44.307.

Nishimiki M, Rao NA, Yagi K: Superoksido anijono atsiradimas redukuoto fenazino metosulfato ir molekulinio deguonies reakcijoje. Biochem Biophys Res Commun. 1972, 46: 849-853. 10.1016/S0006-291X(72)80218-3.

Slinkard K, Slingleton VL: Bendrosios fenolio analizės: automatizavimas ir palyginimas su rankiniu metodu. Am J Enol Viticult. 1997, 28: 49-55.

Meda A, Lamien CE, Romito M, Millogo J, Nacoulma OG: bendro fenolio, flavonoidų ir prolino kiekio nustatymas burkina fasan meduje, taip pat jų radikalų šalinimo aktyvumas. Food Chem. 2005, 91: 571-577. 10.1016/j.foodchem.2004.10.006.

NCCLS (Nacionalinis klinikinių laboratorijų standartų komitetas): pamatinis sultinio praskiedimo priešgrybelinio konidiją formuojančių siūlinių grybų jautrumo tyrimo metodas: siūlomas standartas M38-P. 1998 m., NCCLS, Wayne, PA, JAV

Sarker SD, Nahar L, Kumarasamy Y: mikrotitro plokštelės pagrindu atliktas antibakterinis tyrimas, kuriame resazurinas yra ląstelių augimo indikatorius ir jo taikymas in vitro fitocheminių medžiagų antibakterinė patikra. Metodai. 2007, 42: 321-324. 10.1016/j.ymeth.2007.01.006.

Mosmann T: Greitas kolorimetrinis ląstelių augimo ir išgyvenimo tyrimas: taikymas proliferacijos ir citotoksiškumo tyrimams. J imunolio metodai. 1983, 65: 55-63. 10.1016/0022-1759(83)90303-4.

Ohno M, Abe T: Greitas kolorimetrinis tyrimas leukemiją slopinančio faktoriaus (LIF) ir interleukino-6 (IL-6) kiekybiniam įvertinimui. J imunolio metodai. 1991, 145: 199-203. 10.1016/0022-1759(91)90327-C.

Shahidi F, Wanasundara PKJPD: fenoliniai antioksidantai. Crit Rev Food Sci Nutr. 1992, 32: 67-103. 10.1080/10408399209527581.

Kaushik R, Narayanan P, Vasudevan V, Muthukumaran G, Antony U: Kultivuojamų stevijos lapų maistinė sudėtis ir polifenolių bei augalinių pigmentų įtaka juslinėms ir antioksidacinėms lapų ekstraktų savybėms. J Food Sci Technol. 2010, 47: 27-33. 10.1007/s13197-010-0011-7.

Sawa T, Nakao M, Akaike T, Ono K, Maeda H: Alkilperoksilo radikalų šalinimo aktyvumas iš įvairių flavonoidų ir kitų fenolinių junginių: Poveikis daržovių priešnavikiniam promotoriniam poveikiui. J Agric Food Chem. 1999, 47: 397-492. 10.1021/jf980765e.

Mohammed FAG, Nagendra PK, Kong KW, Amin I: Flavonoidas, hesperidinas, bendras fenolio kiekis ir antioksidacinė veikla iš citrusinių vaisių rūšių. Afr J Biotechnol. 2010, 9: 326-330.

Ranković B, Ranković D, Kosanić M, Marić D: Antioksidacinės ir antimikrobinės kerpių savybės Anaptychya ciliaris, Nephroma parile, Ochrolechia tartarea ir Parmelia centrifuga. Cent Eur J Biol. 2010, 5: 649-655. 10.2478/s11535-010-0043-z.

Odabasoglu F, Aslan A, Cakir A, Suleyman H, Karagoz Y, Halici M, Bayir Y: trijų kerpių rūšių antioksidacinio aktyvumo ir fenolio kiekio palyginimas. Phytother Res. 2004, 18: 938-941. 10.1002/ptr.1488.

Mukherjee S, Pawar N, Kulkarni O, Nagarkar B, Thopte S, Bhujbal A, Pawar P: standartinės Ajurvedos formulės Vayasthapana Rasayana laisvųjų radikalų gesinimo savybių įvertinimas. BMC Complem Altern Med. 2011, 11: 38-10.1186/1472-6882-11-38.

Gulcin I, Oktay M, Kufrevioglu OI, Aslan A: kerpių antioksidacinio aktyvumo nustatymas Cetraria islandica (L) Ach. J Etnofarmakolas. 2002, 79: 325-329. 10.1016/S0378-8741(01)00396-8.

Behera BC, Verma N, Sonone A, Makhija U: Antioksidacinė ir antibakterinė kerpių veikla Usnea ghattensis in vitro. Biotechnol Lett. 2005, 27: 991-995. 10.1007/s10529-005-7847-3.

Kekuda PTR, Vinayaka KS, Praveen Kumar SV, Sudharshan SJ: Antioksidacinis ir antibakterinis kerpių ekstraktų, medaus ir jų derinio aktyvumas. J Pharm Res. 2009, 2: 1875-1878.

Manojlović N, Vasiljević P, Gritsanapan W, Supabphol R, Manojlović I: Fitocheminiai ir antioksidantų tyrimai Laurera benguelensis auga Tailande. Biol Res. 2010, 43: 169-176.

Aslan A, Gulluce M, Sokmen M, Adiguzel A, Sahin F, Ozkan H: Antioksidacinės ir antimikrobinės kerpių savybės Cladonia foliacea, Dermatocarpon miniatum, Evernia divaricata, Evernia prunastri ir Neofuscella pulla. Pharm Biol. 2006, 44: 247-252. 10.1080/13880200600713808.

Adedapo A, Jimoh F, Koduru S, Afolayan JA, Masika JM: Antibakterinės ir antioksidacinės lapų ir stiebų metanolio ekstraktų savybės Calpurina aurea. BMC Complem Altern Med. 2008, 8: 53-60. 10.1186/1472-6882-8-53.

Yang Y, Anderson EJ: Kiaulių mieloperozidazės antimikrobinis aktyvumas prieš augalų fatgenines bakterijas ir grybelius. J Appl Microbiol. 1999, 86: 211-220. 10.1046/j.1365-2672.1999.00652.x.

Heijenoort J: Glikano grandinių susidarymas bakterinio peptidoglikano sintezėje. Glikobiologija. 2001, 11: 25-36.

Ruiz-Herera J: Grybelinė ląstelių sienelė: struktūra, sintezė ir surinkimas. 1992 m., CRC Press, Boca Roton, JAV

Farkaš V: Grybelinių ląstelių sienelių struktūra ir biosintezė: metodologiniai metodai. „Folia Microbiol“. 2003, 48: 469-478. 10.1007/BF02931327.

Candan M, Yilmaz M, Tay T, Erdem M, Turk AO: Antimikrobinis kerpių ekstraktų aktyvumas Parmelia sulcata ir jo sudedamoji dalis salazino rūgštis. Z Naturforsch. 2007, 62: 619-621.

Goel M, Dureja P, Rani A, Uniyal PL, Laatsch H: pagrindinių Himalajų kerpių sudedamųjų dalių išskyrimas, apibūdinimas ir priešgrybelinis aktyvumas Parmelia reticulata Tayl.†. J Agr Food Chem. 2011, 59: 2299-2307. 10.1021/jf1049613.

Bezivin C, Tomasi S, Lohezic-Le Devehat F, Boustie C: Kai kurių kerpių ekstraktų citotoksinis aktyvumas pelių ir žmogaus vėžio ląstelių linijose. Phytomed. 2003, 10: 499-503. 10.1078/094471103322331458.

Manojlović N, Vasiljević P, Jusković M, Najman S, Janković S, Milenkovic-Andjelković A: HPLC analizė ir kerpių ekstraktų citotoksinis potencialas, Thamnolia vermicularis var. Subuliformis. J Med Plants Res. 2010, 4: 817-823.

Triggiani D, Ceccarelli D, Tiezzi A, Pisani T, Munzi S, Gaggi C, Loppi S: Antiproliferacinis kerpių ekstraktų aktyvumas pelių mielomos ląstelėse. Biologija. 2009, 64: 59-62. 10.2478/s11756-009-0005-y.

Bucar F, Schneider I, Ogmundsdottir H, Ingolfsdottir K: Antiproliferaciniai kerpių junginiai, slopinantys 12(S)-HETE gamybą žmogaus trombocituose. Phytomed. 2004, 11: 602-606. 10.1016/j.phymed.2004.03.004.

Burlando B, Ranzato E, Volante A, Appendino G, Pollastro F, Verotta L: Antiproliferacinis poveikis naviko ląstelėms ir keratinocitų žaizdų gijimo skatinimas įvairiais kerpių junginiais. Planta Med. 2009, 75: 607-613. 10.1055/s-0029-1185329.

Istorija prieš leidybą

Šio dokumento išankstinio paskelbimo istoriją galima rasti čia: http://www.biomedcentral.com/1472-6882/11/97/prepub


  1. Bandomasis pavyzdys
  2. Plokštelių skaičiaus agaras (PCA) arba maistinių medžiagų agaras
  3. Karšto vandens vonia 45°C
  4. Sterilūs Petri indai
  5. Liepsna
  6. Kolonijų skaitiklis su padidinamuoju stiklu
  7. Sterilūs 16*150 mm mėgintuvėliai su kamšteliu
  8. Įvairių dydžių pipetės (pvz., 01, 1,0 ir 2,0 ml)
  1. Paruoškite tiriamojo mėginio praskiedimą, kuriame turėtų būti 30–300 KSV/mL. (Laikykitės serijinio skiedimo technikos)
  2. Pažymėtą tuščią Petri lėkštelę pasėkite nurodytu ml (0,1 arba 1,0 ml) praskiesto mėginio

Pastaba: išsamų pipetės naudojimo, mėginio inokuliavimo, skiedimo technikos ir tt aprašymą rasite 1 nuorodoje.

Išlydyto agaro išpylimas ir inkubavimas

  1. Surinkite vieną butelį sterilaus išlydyto agaro (kuriame yra 15 ml ištirpinto lėkštelių skaičiaus agaro arba bet kurios kitos standartinės auginimo terpės) iš vandens vonios (45°C).
  2. Laikykite buteliuką dešine ranka, nuimkite dangtelį kairiosios rankos mažuoju pirštu.
  3. Uždegkite butelio kaklelį.
  4. Kaire ranka šiek tiek pakelkite Petri lėkštelės dangtelį ir supilkite sterilų išlydytą agarą į Petri lėkštelę ir uždėkite dangtelį.
  5. Uždegkite butelio kaklelį ir uždėkite dangtelį.
  6. Švelniai pasukite plokštelę ant stalo, kad kultūra ir terpė gerai susimaišytų. Užtikrinkite, kad terpė tolygiai padengtų lėkštę, ir neslystų agaru per Petri lėkštelės kraštą.
  7. Leiskite agarui visiškai sustingti jo netrikdydami, tai užtruks maždaug 10 minučių.
  8. Uždenkite ir inkubuokite plokštelę apverstą 37°C temperatūroje 24–48 valandas.

Santraukos

Trichophyton mentagrophytes yra grybelis, sukeliantis dermatofitozę, paveikiantis žmones visame pasaulyje. Tai paskatino ieškoti produktų, skirtų šioms infekcijoms gydyti. Atitinkamai, šio tyrimo tikslas buvo ištirti Cymbopogon winterianus eterinio aliejaus priešgrybelinį aktyvumą prieš T. mentagrophytes. Priešgrybelinius tyrimus sudarė priešgrybelinis patikrinimas, MIC ir MFC nustatymas, eterinio aliejaus poveikio grybienos augimui, grybelio sporų daigumui, grybelio gyvybingumui, morfogenezei, ląstelės sienelės (tyrimas su sorbitoliu) ir ląstelės membranos (ląstelių nuotėkio testas) analizė. T. mentagrophytes. Atrankos metu aliejus slopino visas padermes, o augimo slopinimo zonos buvo 24–28 mm skersmens. Beveik visų tirtų padermių MIC buvo 312 μg/mL, o CFM – 2500 μg/mL. Buvo morfologinių konidijų grupės, hifų formos ir pigmentacijos pokyčių. Preparato priešgrybelinis poveikis neapima ląstelės sienelės, o jo veikimas gali būti susijęs su grybelio plazmine membrana. Daroma išvada, kad C. winterianus eterinis aliejus yra potencialus priešgrybelinis produktas, ypač dermatofitozės gydymui.

Trichophyton mentagrophytes Dermatofitozė Cymbopogon winterianus Dermatofitozė Cymbopogon winterianus Dermatofitai

Trichophyton mentagrophytes é um fungo causador de dermatofitoses, afetando humanos em todo o mundo. Isto direciona a busca de produtos para o tratamento destas infecções. Assim, este estudo teve por objetivo investigar a atividade antifúngica do óleo essencial de Cymbopogon winterianus contra T. mentagrophytes. Os ensaios antifúngicos foram constituídos do screening antifúngico, da determinação CIM e CFM, da análise dos efeitos do óleo essencial no crescimento micelial, na germinação dos sorceliocelna (comlarucelna) na viabilidade mornaêlarebit, fúngicaednes (ensaio de lise celular) de T. mentagrophytes. No screening, o óleo inibiu todas as cepas, com zonas de inibição de crescimento de 24-28 mm de diâmetro. CIM foi de 312 μg/mL ir CFM foi de 2500 μg/mL para quase todas kaip cepas testadas. O óleo essencial inibiu o desenvolvimento micelial, a germinação dos esporos e a viabilidade fúngica. Houve alterações morfológicas no agrupamento dos conídios, na forma e pigmentação das hifas. Ação antifúngica do produto não envolve a parede cellular e parece estar envolvida com a membrana cellular fungica. Pode-se concluir que o óleo essencial de C. winterianus se apresenta como um potencial produto antifúngico, especialmente para o tratamento das dermatofitoses.

Trichophyton mentagrophytes Cymbopogon winterianus Cymbopogon winterianus Dermatofitoses Dermatofitos

Poveikis Cymbopogon winterianusJowitt ex Bor eterinis aliejus apie augimą ir morfogenezę Trichophyton mentagrophytes

Fillipe de Oliveira PereiraI, * * Susirašinėjimas: F. O. Pereira. Laboratório de Micologia, Departamento de Ciências Farmacêuticas, Centro de Ciências da Saúde, Universidade Federal da Paraíba, 58051-900 Campus Universitário I, Castelo Branco I – João Pessoa – PB, Bra. El. paštas: [email protected] Paulo Alves Wanderley II Fernando Antônio Cavalcanti Viana III Rita Baltazar de Lima IV Frederico Barbosa de Sousa V Sócrates Golzio dos Santos VI Edeltrudes de Oliveira Lima

I Mikologijos laboratorija, Farmacijos mokslų katedra, Sveikatos mokslų centras, Paraíbos federalinis universitetas

II Federalinis švietimo, mokslo ir technologijų institutas, Sousa-PB departamentas

III Vaistinių augalų sodas, Farmacijos technologijos laboratorija, Paraíbos federalinis universitetas

IV Botanikos laboratorija, Sistematikos ir ekologijos katedra, Matematikos mokslų ir gamtos centras, Paraíbos federalinis universitetas

V Mikroskopijos ir biologinio vaizdo laboratorija, Sveikatos mokslų centras, Paraíbos federalinis universitetas

VI Farmacijos technologijos laboratorija, Paraíbos federalinis universitetas

Trichophyton mentagrophytes yra grybelis, sukeliantis dermatofitozę, paveikiantis žmones visame pasaulyje. Tai paskatino ieškoti produktų, skirtų šioms infekcijoms gydyti. Atitinkamai, šio tyrimo tikslas buvo ištirti priešgrybelinį aktyvumą Cymbopogon winterianus eterinis aliejus nuo T. mentagrophytes. Priešgrybelinius tyrimus sudarė priešgrybelinis patikrinimas, MIC ir MFC nustatymas, eterinio aliejaus poveikio grybienos augimui, grybų sporų daigumui, grybelio gyvybingumui, morfogenezei, ląstelės sienelės (testas su sorbitoliu) ir ląstelės membranos (ląstelių nuotėkio testas) analizė. T. mentagrophytes. Atrankos metu aliejus slopino visas padermes, o augimo slopinimo zonos buvo 24–28 mm skersmens. Beveik visų tirtų padermių MIC buvo 312 μg/mL, o CFM – 2500 μg/mL. Buvo morfologinių konidijų grupės, hifų formos ir pigmentacijos pokyčių. Preparato priešgrybelinis poveikis neapima ląstelės sienelės, o jo veikimas gali būti susijęs su grybelio plazmine membrana. Daroma išvada, kad C. winterianus eterinis aliejus yra potencialus priešgrybelinis produktas, ypač dermatofitozės gydymui.

Vienetiniai terminai: Trichophyton mentagrophytes/ mikologija. Dermatofitozė Cymbopogon winterianus/eterinis aliejus / priešgrybelinis aktyvumas. Dermatofitai.

Trichophyton mentagrophytes é um fungo causador de dermatofitoses, afetando humanos em todo o mundo. Isto direciona a busca de produtos para o tratamento destas infecções. Assim, este estudo teve por objetivo investigar atividade antifúngica do óleo essencial de Cymbopogon winterianus kontra T. mentagrophytes. Os ensaios antifúngicos foram constituídos do atranka antifúngico, da determinação CIM e CFM, da análise dos efeitos do óleo essencial no crescimento micelial, na germinação dos esporos, na viabilidade fúngica, na morfogiocelunese, deparede celular membrana T. mentagrophytes. Ne atranka, o óleo inibiu todas as cepas, com zonas de inibição de crescimento de 24-28 mm de diâmetro. CIM foi de 312 μg/mL ir CFM foi de 2500 μg/mL para quase todas kaip cepas testadas. O óleo essencial inibiu o desenvolvimento micelial, a germinação dos esporos e a viabilidade fúngica. Houve alterações morfológicas no agrupamento dos conídios, na forma e pigmentação das hifas. Ação antifúngica do produto não envolve a parede cellular e parece estar envolvida com a membrana cellular fungica. Pode-se concluir que o óleo essencial de C. winterianus se apresenta como um potencial produto antifúngico, especialmente para o tratamento das dermatofitoses.

Unitermos:Trichophyton mentagrophytes/micologia. Cymbopogon winterianus/óleo essencial/atividade antifúngica. Dermatofitozė/tratamento. Dermatofitos.

Dermatofitai yra grupė susijusių patogeninių grybų, besispecializuojančių keratininiuose substratuose, tokiuose kaip žmonių ir kitų gyvūnų oda, plaukai ir nagai, sukeliantys dermatofitozę (Weitzman, Summerbell, 1995). Dermatofitoze serga maždaug 40 % pasaulio gyventojų ir sudaro 30 % visų grybelinių odos infekcijų. T. mentagrophytes, be kitų dermatofitų, kankina žmogų, kitus žinduolius ir paukščius. Jis paplitęs visame pasaulyje, daugiausia pažeidžiantis žmogaus galvos odą, pėdas ir rankas, nagus ir tarpupirščius. Šiuo metu tai yra vienas iš dažniausiai žmonių aptinkamų dermatofitų (Oyeka, 2000).

Deja, priešgrybelinių vaistų, skirtų kovai su dermatofitoze, skaičius yra ribotas. Be to, ši infekcija gali tapti atspari gydymui, todėl jis tampa neveiksmingas (Favre ir kt., 2003). Pastaraisiais metais labai padaugėjo grybelinių infekcijų atvejų, o priešgrybelinių preparatų naudojimas išaugo, o dėl to išaugo atsparių padermių atsiradimas. Taigi tyrimai, kuriais siekiama sukurti naujus priešgrybelinius produktus, tapo būtini.

Šiame kontekste susidomėjimas augalais, turinčiais priešgrybelinių savybių, padidėjo, nes jie yra perspektyvus potencialių naujų produktų šaltinis. Vaistinių augalų eteriniai aliejai buvo dažniausiai naudojami daugelio kūno dalių, įskaitant odą, infekcinėms patologijoms gydyti (Rios Recio, 2004). Jau seniai pripažinta, kad kai kurie eteriniai aliejai yra plačiai naudojami antimikrobinei veiklai, ypač farmacijos, sanitarijos, kosmetikos, žemės ūkio ir maisto pramonėje (Bakkali). ir kt., 2008).

Cymbopogon winterianus Jowitt ex Bor (Poaceae), liaudiškai žinomas kaip "citronella" arba "java citronella", yra daugiametis augalas, formuojantis vieno metro aukščio kompaktiškus ir stiprius gumulėlius, plačiai naudojamas populiariojoje medicinoje Brazilijos pakrantėje. Jis naudojamas kaip priešgrybelinis, akaricidas ir repelentas nuo įvairių vabzdžių (Pandey, Rai, 2003). Šis tyrimas buvo atliktas siekiant ištirti priešgrybelinį aktyvumą C. winterianus eterinis aliejus, analizuojant jo poveikį T. mentagrophytes štamai.

Lapai iš C. winterianus 2007 m. vasario mėn. buvo paimti iš Paraibos federalinio universiteto Technikų formavimo centro (IV miestelis), Bananeiras miestas, Paraiba valstija, Brazilija, 2007 m. vasario mėn. Buvo gautas augalo botaninis identifikavimas ir čekio pavyzdys (JPB 41387) deponuotas herbariumui Profesorius Lauro Piresas Xavieras iš Paraibos federalinio universiteto.

Švieži lapai C. winterianus buvo supjaustyti gabalėliais ir distiliuoti vandeniu naudojant Clevenger aparatą. Gautas eterinis aliejus (tankis = 0,8790 g/ml) buvo laikomas gintaro spalvos buteliuke ir palaikomas žemesnėje nei 4 °C temperatūroje. Aliejaus emulsija, naudojama priešgrybeliniams tyrimams, buvo gauta pagal šią procedūrą: 34 μL eterinio aliejaus, 10 μL tween 80 ir q.s.f. Į sterilų mėgintuvėlį įpilama 3 ml sterilaus distiliuoto vandens ir 3 minutes purtoma naudojant sūkurinį instrumentą, taip gaunama pradinė emulsija, kurios galutinė koncentracija yra 10 000 μg/mL. Seriatiniai skiedimai buvo atliekami santykiu po du, kad būtų gautos 5000 – 5 μg/mL emulsijos.

Aštuonios atmainos T. mentagrophytes buvo naudojami priešgrybeliniuose tyrimuose. Šie dermatofitai buvo gauti iš Paraibos federalinio universiteto Sveikatos mokslų centro Farmacijos mokslų departamento Mikologijos laboratorijos (LM) kolekcijos. Grybai buvo laikomi bulvių dekstrozės agare (PDA) – Difco® – 28 °C ir 4 °C temperatūroje iki bandymo procedūrų.

Pradiniai inokuliai iš T. mentagrophytes padermės buvo paruoštos iš 10 dienų kultūrų PDA 28 ° C temperatūroje, kad sukeltų sporuliaciją. Grybų kolonijos buvo padengtos 5 ml sterilaus fiziologinio tirpalo (NaCl 0,85 % m/t), paviršius švelniai subraižytas sterilia kilpa, o gautas grybų vienetų mišinys buvo perkeltas į sterilų mėgintuvėlį. Galutinio inokuliato drumstumas buvo standartizuotas pagal McFarland skalės 0, 5 mėgintuvėlį ir pritaikytas prie 106 kolonijų buvusių vienetų (CFU) grybų populiacijos. Inokuliato kiekybinis nustatymas buvo patvirtintas 0, 01 ml inokuliato suspensijos į Sabouraud dekstrozės agarą (SDA). Lėkštelės buvo inkubuojamos 28 °C temperatūroje ir kasdien tiriamos, ar nėra grybelių kolonijų, kurios buvo skaičiuojamos iš karto, kai tik buvo matomas augimas (Santos ir kt., 2006 Hadacek, Greger, 2000).

Priešgrybelinio aktyvumo patikrinimas

Priešgrybelinio aktyvumo atrankai buvo naudojamas kietos terpės difuzijos metodas, naudojant filtravimo popieriaus diskus (Hadacek, Greger, 2000 Adam ir kt., 1998). Sterilus Sabouraud dekstrozės agaras (SDA) – Difco ® – buvo paruoštas ir tolygiai paskirstytas į sterilias Petri lėkšteles, kur anksčiau buvo pasėtas 1 ml grybelio suspensijos. Vėliau filtravimo popieriaus diskai (skersmuo 6 mm) buvo suvilgyti eteriniu aliejumi ir uždedami ant inokuliuoto agaro paviršiaus. Indai buvo inkubuojami 37 ° C temperatūroje 8 dienas. Inkubacinio laikotarpio pabaigoje buvo išmatuotas grybelio augimo slopinimo zonos skersmuo ir išreikštas milimetrais. Rezultatai buvo laikomi teigiamais priešgrybelinio aktyvumo atžvilgiu, kai vidutinės augimo slopinimo zonos vertės dviejuose nepriklausomuose tyrimuose buvo didesnės arba lygios 10 mm skersmens.

Mažiausios slopinančios koncentracijos (MIC) nustatymas

MIC vertės buvo nustatytos grybų padermėms, kurios buvo jautrios eteriniam aliejui kietos terpės difuzijos tyrime. Sultinio mikroskiedimo biologinis tyrimas buvo naudojamas MIC nustatyti C. winterianus eterinis aliejus (Moreira ir kt., 2010 Sahin ir kt., 2004). Tam buvo naudojami 96 šulinėlių indai (plokščiadugniai) ir dangteliai. 96 šulinėlių indai buvo paruošti į kiekvieną šulinėlį išpilant 100 μL dvigubai koncentruoto Sabouraud dekstrozės sultinio (SDB) (Difco®). 100 μL tūris iš eterinio aliejaus pradinės emulsijos buvo įdėtas į pirmuosius šulinius. Vėliau 100 μL iš jų serijinių skiedimų buvo perkelta į nuoseklius šulinukus, išskyrus paskutinį. Paskutinėje duobutėje buvo 100 μl sultinio, užsėto grybelio inokuliu, siekiant patvirtinti ląstelių gyvybingumą (gyvybingumo kontrolė). Teigiama kontrolė buvo atlikta panašiai su standartiniais priešgrybeliniais vaistais, naudojant ketokonazolą (Sigma-Aldrich®). Abiem atvejais didžiausia koncentracija (5000 μg/mL) buvo dedama į pirmąsias duobutes, o mažiausia koncentracija (5 μg/mL) – į priešpaskutines duobutes. Buvo atlikta tiriamų padermių jautrumo kontrolė tween 80 be eterinio aliejaus. 100 μl 5% tween 80 sultinyje buvo įdėta į šulinėlius ir į kiekvieną atitinkamą šulinėlį buvo pasėta 10 μL grybelių suspensijos. Taip pat buvo atlikta sterilumo kontrolė, siekiant patikrinti, ar priešgrybeliniame tyrime naudojamas sultinys buvo užterštas prieš bandymo procedūras. Tam į šulinį buvo išpilstytas 100 μl sultinio be eterinio aliejaus ar inokuliato.

Visi indai buvo aseptiškai uždaryti, tada maišomi ant plokštelės purtytuvo (300 aps./min.) 30 sekundžių, inkubuojami 28 ° C temperatūroje ir nuskaitomi po 5 inkubavimo dienų. MIC reikšmės buvo nustatytos vizualiai apžiūrint kiekvieno šulinėlio augimo slopinimą, lyginant su kontrolinės (be vaistų) duobutės. MIC buvo apibrėžta kaip mažiausia eterinio aliejaus koncentracija, galinti 100 slopinti grybelio augimą. Bandymas buvo atliktas dviem egzemplioriais ir apskaičiuotos vidutinės geometrinės vertės (Santos ir kt., 2006).

Mažiausios fungicidų koncentracijos (MFC) nustatymas

MFC buvo nustatytas mikroskiedimo metodu, siekiant patikrinti, ar slopinimas buvo grįžtamas ar nuolatinis (Denning ir kt., 1992 Rasooli Abyaneh, 2004). 20 μL alikvotinės dalys iš šulinėlių, kurių MIC procedūra neparodė augimo, buvo perkeltos į 96 šulinėlių indus, anksčiau paruoštus su 100 μL SDB. Indai buvo aseptiškai uždaryti, tada maišomi ant plokštelės purtytuvo (300 aps./min.) 30 sekundžių, inkubuojami 28 °C temperatūroje ir nuskaitomi praėjus 5 dienoms po inkubacijos. Bandymas buvo atliktas dviem egzemplioriais ir apskaičiuotos geometrinės vidutinės reikšmės. MFC buvo apibrėžiamas kaip mažiausia eterinio aliejaus koncentracija, kurios augimas nebuvo matomas, kai buvo auginamas 96 šulinėlių induose, kuriuose buvo sultinio be priešgrybelinių produktų.

Poveikis grybienos augimui

Eterinio aliejaus trukdžių analizė C. winterianus Grybienos augimas buvo atliktas nustatant sauso grybienos svorį T. mentagrophytes LM02 (Rasooli, Abyaneh, 2004 Sharma, Tripathi, 2006). Kolbos, kuriose yra 2500, 625, 312 ir 156 μg/mL eterinio aliejaus SDB terpėje, buvo pasėtos bandymo suspensija T. mentagrophytes įtempti. Korespondentinėje kontrolėje toks pat kiekis eterinio aliejaus buvo pakeistas distiliuotu vandeniu. Sistema buvo inkubuojama 28 ° C temperatūroje 15 dienų. Nuo šeštos inkubacijos dienos grybienos sausasis svoris buvo nustatytas kas 3 dienas. Kolbos su grybiena buvo filtruojamos per Whatman filtrą Nr. 1 (dalelių sulaikymas: 11 μm), o po to nuplaunamas distiliuotu vandeniu. Grybienos buvo džiovinamos 60 ° C temperatūroje 6 valandas, o po to 40 ° C temperatūroje per naktį. Filtravimo popierius, kuriame yra sausų grybų iš dviejų nepriklausomų tyrimų, buvo pasvertas ir gautos vidutinės vertės. Procentinis augimo slopinimas, pagrįstas sausos masės svoriu kiekvienu analizės metu, buvo apskaičiuotas pagal Sharma ir Tripathi (2006).

Sporų daigumo tyrimas

Įvertinti eterinio aliejaus galią C. winterianus apie grybų sporų dygimą T. mentagrophytes Buvo naudojamas LM02, eterinių aliejų koncentracijos 156, 312, 625 ir 2500 μg/mL, kontrolinė medžiaga su tween 80 (10 % distiliuotame vandenyje) ir kita kontrolė su distiliuotu vandeniu. Steriliuose mėgintuvėliuose 500 ml dvigubai koncentruoto CSD ir eterinio aliejaus buvo tolygiai sumaišyti su 500 ml grybelinės konidijų suspensijos ir nedelsiant inkubuojami 28 ° C temperatūroje. Šio mišinio mėginiai buvo paimti po 24 valandų inkubacijos analizei. Visas eksperimentas buvo atliktas dviem egzemplioriais, kur Neubauer kameroje buvo nustatytas konidijų skaičius ir skaičiuojamas sporų dygimo slopinimo procentas kiekvienu laiko momentu, lyginant bandomuosiuose eksperimentuose gautus rezultatus su kontrolinio eksperimento rezultatais. Analizė buvo atlikta optiniu mikroskopu (Zeiss® Primo Star) (Rana ir kt., 1997 Liu ir kt., 2007).

Grybelio gyvybingumo tyrimas buvo atliktas su eteriniu aliejumi C. winterianus 156, 312, 625 ir 2500 μg/mL, naudojant gyvybingų grybelinių struktūrų skaičiavimo metodą. 4 ml tūrio CSD buvo pasėtas 1 ml grybelinės suspensijos. Tada eterinio aliejaus buvo pridėta iki tiek, kiek reikia anksčiau nurodytoms koncentracijoms pasiekti. 1 ml tūrio inokuliato ir po to eterinio aliejaus buvo pridėta iki tiek, kiek reikia anksčiau nurodytoms koncentracijoms pasiekti. Visa sistema buvo inkubuojama 28 ° C temperatūroje. Skirtingais laiko intervalais (3, 6, 9 ir 12 dienų) po inkubacijos 0, 5 ml alikvotinė dalis iš mėgintuvėlių buvo praskiedžiama steriliu vandeniu, paskleista ant SDA Petri lėkštelių ir 5 dienas inkubuojama 28 ° C temperatūroje. Buvo naudojama kontrolė su tween 80 (10 % distiliuotame vandenyje) ir kita kontrolė be eterinio aliejaus. Buvo atliktas gyvybingų kolonijų skaičiaus skaičiavimas ir išreikštas logCFU/mL (Rasooli ir kt., 2004).

Grybelio morfogenezės tyrimas

Eterinio aliejaus sukeltų mikromorfologinių pakitimų įvertinimas C. winterianus į T. mentagrophytes LM02 buvo atliktas dviem egzemplioriais stiklelių kultūros metodu. Pirma, SDA blokas, kuriame yra eterinio aliejaus (78, 156, 312 μg / ml), buvo perkeltas į stiklinės stiklelio centrą Petri lėkštelėje su filtravimo popieriaus gabalėliu. Vėliau grybienos mėginys buvo paimtas iš 10 dienų senumo grybelio kolonijos, išaugintos PDA, periferijos ir pasėtas ant agaro terpės bloko šonų centro. Į Petri lėkštelės dugną įpilama apie 1,5 ml sterilaus vandens ir inkubuojama 28 °C temperatūroje 5 dienas. Po inkubacijos skaidrės su reprodukcinėmis struktūromis buvo fiksuotos lakto-fenolio-medvilnės mėlynos spalvos dėme ir stebimos optiniu mikroskopu (Olympus ® modelis CH-30) 400 kartų, siekiant ištirti morfologinius anomalijas. Struktūriniai pokyčiai, pastebėti atliekant optinę mikroskopiją bandomuosiuose tyrimuose, buvo užregistruoti ir palyginti su normaliu augimu, nustatytu kontrolinio eksperimento metu. Kontrolinis tyrimas be eterinio aliejaus buvo išbandytas tokiu pačiu būdu (Gunji ir kt., 1983 Šaltis ir kt., 1995).

Sorbitolio apsaugos tyrimas

MIC reikšmės C. winterianus eterinis aliejus buvo nustatytas naudojant T. mentagrophytes padermes naudojant sultinio mikroskiedimo procedūrą, aprašytą anksčiau. Buvo paruošti dubliuoti patiekalai: viename iš jų buvo 2 kartus praskiesti eterinis aliejus, o kitame buvo eterinis aliejus ir 0,8 M sorbitolis kaip osmosinė atrama, kiekviename iš šulinių. MIC buvo nuskaityti po 5 dienų (Escalante ir kt., 2008).

Ląstelių nutekėjimo poveikis

Eterinis aliejus iš C. winterianus 78, 156, 312 μg/ml buvo įpilta į 10 ml grybų suspensijos T. mentagrophytes LM02 naudojant sterilius vamzdelius. Kaip etaloninis junginys buvo naudojamas 25 % alkoholio kalio hidroksido tirpalas (atskiestas 70 % etanoliu), kuris sukelia 100 % ląstelių nutekėjimą. Amfotericino B MIC (0,60 μg/ml) buvo naudojamas kaip teigiama kontrolė. Ląstelės buvo inkubuojamos 28 ° C temperatūroje, o mėginiai buvo imami tam tikrais laiko intervalais (2, 4 ir 24 val.) ir 5 minutes sukami 3000 aps./min. centrifugavimo mėgintuvėliuose. Supernatantai buvo surinkti absorbcijos analizei esant 260 nm Varian Cary 50 spektrofotometru. Rezultatai išreiškiami kaip procentinės ląstelių nuotėkio verčių vidurkis iš dviejų nepriklausomų tyrimų (Escalante ir kt., 2008 Lunde, Kubo, 2000)

Eterinio aliejaus poveikio grybienos svoriui tyrimo statistinė analizė atlikta siekiant nustatyti statistiškai reikšmingus skirtumus (P <0,05), naudojant dispersinę analizę (vienpusė ANOVA), naudojant Kruskal-Wallis testą, po to Dunn post- bandymas. Tam buvo atlikta statistinė analizė naudojant GraphPad Prism 4.03 versiją, skirtą Windows, San Diegas, Kalifornija, JAV.

REZULTATAI IR DISKUSIJA

Priešgrybelinio aktyvumo rezultatai C. winterianus eterinis aliejus T. mentagrophytes padermės parodytos I lentelėje. Eterinis aliejus gamtoje sugebėjo slopinti visas tirtas padermes, kurių slopinimo zonų skersmuo buvo 24–28 mm. MIC reikšmės taip pat apibendrintos I lentelėje. Kaip matyti, eterinio aliejaus MIC buvo 312 μg/ml visoms tirtoms padermėms, išskyrus vieną. Mažiausia MIC vertė buvo 156 μg/mL T. mentagrophytes LM07. Ketokonazolo MIC buvo mažesnis nei eterinio aliejaus, kur ketokonazolo MIC vertės buvo 78, 156 ir 312 μg/ml. Kontrolės rezultatai parodė, kad grybelio augimas neslopinamas tween 80, o grybų augimas sultinyje buvo aptiktas nepridedant vaistų (sterilumo kontrolė). Fungicidinis poveikis buvo stipresnis T. mentagrophytes LM07, patvirtina mažiausia MFC vertė 1250 μg/mL. Visų išbandytų padermių MFC vertės buvo maždaug aštuonis kartus didesnės nei MIC. Tačiau ketokonazolo MFC buvo maždaug šešiolika kartų didesnis už MIC vertes (1250–5000 μg/ml).

Jau seniai buvo pripažinta, kad kai kurie eteriniai aliejai turi antimikrobinių savybių, kurios gali būti susijusios su šių junginių funkcija augaluose (Burt, 2004). Anksčiau buvo įrodyta, kad šis eterinis aliejus turi antimikrobinį poveikį prieš įvairius žmonėms ir augalams patogeninius mikroorganizmus, yra naudingas kovojant su grybelinėmis ligomis didelėse plantacijose, be to, kad jis veikia kaip repelentas ir insekticidas (Simic). ir kt., 2008 De-Blasi ir kt., 1990).Ankstesni tyrimai parodė, kad citronelalis ir geraniolis parodė priešgrybelinį poveikį Aspergillus niger, Fusarium oxysporum ir Penicillium digitatum (Moleyar, Narasimham, 2004). Tačiau yra mažai informacijos apie poveikį C. winterianus eterinis aliejus nuo klasikinių svarbių grybelių, susijusių su žmonių infekcijomis, įskaitant dermatofitų rūšis.

Poveikis C. winterianus eterinis aliejus, veikiantis grybienos augimą, išreiškiamas kaip sauso grybelio masės slopinimo procentas T. mentagrophytes LM02 ir pavaizduotas 1 paveiksle. Šis tyrimas atskleidė, kad visos eterinio aliejaus koncentracijos slopina grybienos vystymąsi. Kiekvienu atskiru laiko momentu visos tirtos koncentracijos skyrėsi (P<0,05) nuo 156 μg/ml rezultatų. Be to, esant 156 μg / ml, grybelio augimo kliūtis padidėjo kartu su vaisto ir grybelių ląstelių sąveikos laiku. Su kitomis eterinio aliejaus koncentracijomis visą laiką buvo 100 % slopinimas. Dermatofitai gamina hifus, kurie gali prasiskverbti į vidinį odos sluoksnį ir sustiprinti šeimininko žalą (Zurita, Hay, 1987). Todėl kai kurie mokslininkai tiria eterinių aliejų potencialą slopinti patogeninių grybų grybienos augimą dėl jų svarbos mikozės vystymuisi.

Konidijų dygimo slopinimo procentas T. mentagrophytes LM 02, kurį sukelia skirtingos eterinių aliejų koncentracijos C. winterianus parodytos 2 paveiksle. Apskritai visos eterinio aliejaus koncentracijos stipriai slopino tiriamos padermės konidijų dygimą. Eterinio aliejaus koncentracijai padidėjus nuo 156 iki 625 μg/ml, padidėjo ir slopinimo procentas, pasiekęs reikšmes, artimas 100 %. Nors šie rezultatai yra reikšmingi skaitiniu požiūriu, sudygusių konidijų nebuvimas kultūroje, rodantis bendrą daigumo slopinimą, buvo pastebėtas tik esant 2500 μg/ml. Palyginus šiuos rezultatus, pažymėtina, kad 156 ir 625, 2500 μg / ml slopinimo procentas labai skyrėsi (P <0, 05), o tai patvirtina mintį, kad padidėjusi koncentracija kažkaip sustiprina slopinamąjį poveikį daigumui. Galiausiai buvo nustatyta, kad tween 80 neturėjo įtakos konidijų daigumui. Dėl tinkamo sporų dygimo svarbos dermatofitozės patogenezei eterinio aliejaus sukeltas kišimasis į procesą yra aktualus, nes buvo įrodyta, kad šis produktas yra perspektyvi priemonė įsikišti į šį infekcinį procesą.

3 paveiksle parodyti eterinio aliejaus poveikio rezultatai C. winterianus dėl gyvybingumo T. mentagrophytes LM 02. Atlikus statistinę analizę, buvo pastebėta, kad reikšmės skyrėsi (P<0,05) kiekvienu analizuojamu sąveikos metu. Šiuos pastebėjimus galima matyti iš eterinio aliejaus logCFU/mL vertės, kuri visada yra mažesnė nei kontrolinio eksperimento metu. Eterinis aliejus, kurio koncentracija yra 312 μg/ml, sugebėjo sumažinti grybelio gyvybingumą per visą eksperimentinį laikotarpį ir po devynių dienų sąveikos pasiekė 100 % grybų gyvybingumo slopinimą. Esant 156 μg/ml, šis poveikis taip pat buvo akivaizdus, ​​nors reikėjo ilgesnio aliejaus ir grybų sąveikos laikotarpio (12 ekspozicijos dienų). Tačiau pažymėtina, kad esant didžiausioms koncentracijoms, grybeliams nepavyko išsivystyti nuo trečios sąveikos dienos, todėl sąlygos augti buvo visiškai nepraktiškos. Tween 80 neturėjo įtakos grybelio gyvybingumui.

Grybelių mirtingumo kreivės yra pakankamai jautrios, kaip bandymas, skirtas dinamiškai išmatuoti junginio gebėjimą veikti mikroorganizmo gyvybingumą. Grybelinių struktūrų mirtingumo įvertinimas taip pat gali būti nustatytas tam tikrai antimikrobinio junginio koncentracijai, parodantis fungicidinio poveikio greitį arba fungistatinio poveikio trukmę (Burt, 2003 Cantón Pemán, 1999). Taigi, atsižvelgiant į gautus rezultatus, fungicidinis poveikis buvo patvirtintas visoms eterinio aliejaus koncentracijoms C. winterianus, skiriasi tik laikas, reikalingas šiam efektui parodyti.

Pastebėjimai apie T. mentagrophytes LM02 tiriamas šviesos mikroskopu 400 kartų padidinus po poveikio C. winterianus eterinis aliejus parodė kai kuriuos morfologinius sutrikimus (4 pav.). Eterinis aliejus sukėlė panašius pokyčius visomis koncentracijomis, tačiau žymiai padidėjo, kai aliejaus koncentracija buvo padidinta. Nors forma T. mentagrophytes konidijos nepasikeitė, jų tipinis spiečius buvo labai pažeistas ir buvo įrodyta, kad jos yra labai išsibarsčiusios visose naudojamo eterinio aliejaus koncentracijose. Didžioji dauguma hifų dažnai buvo platesni nei įprasti hifai, labai prarado pigmentaciją ir jose buvo plačiai išsidėsčiusių vakuolių (4 C, D pav.). Mikroskopinis kontrolinės grybienos (neapdorotos ląstelės) tyrimas parodė taisyklingą ląstelės struktūrą su homogenine citoplazma, gausiu konidiacija, ilgais skaidriais pertvariniais hifais, labai suapvalintais mikrokonidijomis, susitelkusiomis ant šakotų konidioforų. Kai kurios makrokonidijos buvo cigarų formos, plonasienėmis ir siauromis prie hifų (4 A, B pav.). Šios ataskaitos rezultatai tiesiogiai veikia ligos patogenezę, nes dermatofitozė priklauso nuo normalios grybų morfogenezės gebėjimo ir jų augimo infekcijos lokuse.

Šios grybelio morfogenezės modifikacijos gali būti susijusios su eterinio aliejaus trukdymu fermentams, atsakingiems už sintezę arba grybelio ląstelės sienelės palaikymą, kaip anksčiau minėjo kiti tyrėjai, pažeidžiant normalų augimą ir ląstelių morfogenezę (Debillerbeck). ir kt. 2001 Gunji ir kt., 1983).

Atsižvelgiant į galimą eterinio aliejaus įsikišimą į grybelio ląstelės sienelę, aliejus buvo išbandytas visos ląstelės sorbitolio apsaugos tyrime. Šiame bandyme sorbitoliu apsaugotos ląstelės gali augti, kai yra grybelio ląstelės sienelės inhibitorių, o jų augimas slopinamas, jei nėra sorbitolio. Šis poveikis nustatomas padidinus MIC vertę, gautą naudojant sorbitolį, palyginti su MIC reikšmėmis be sorbitolio (Svetaz ir kt., 2007). MIC vertės abiejuose eksperimentuose buvo identiškos, todėl tai rodo C. winterianus eterinis aliejus neveikia per grybelio ląstelių sienelių sintezės ar surinkimo slopinimą.

Svarbi savybė C. winterianus Eterinis aliejus ir jo fitocheminės medžiagos (pvz., monoterpenai) yra jų hidrofobiškumas, todėl jie gali sąveikauti su grybelio membrana, trukdydami jos vientisumui. Šią negrįžtamą žalą galima aptikti matuojant 260 nm sugeriančias medžiagas, išsiskiriančias į terpę, visų pirma atstovaujančias nukleotidams, iš kurių uracilo turintys junginiai skirtingais laiko intervalais (2, 4 ir 24 val.) pasižymėjo didžiausia absorbcija. Amfotericinas B buvo naudojamas kaip teigiama kontrolė, nes grybelių membranose gali sudaryti kompleksą su ergosteroliu, taip pakenkdama jų barjerinei funkcijai iki tokio lygio, kad gali nutekėti ląstelių turinys. ir kt., 2003). Rezultatai parodė, kad eterinis aliejus ir amfotericinas B sukėlė 100 % ląstelių nutekėjimą po 4 valandų sąveikos, kaip parodyta II lentelėje. Nors eterinio aliejaus MIC rezultatas buvo didesnis nei teigiamos kontrolės MIC per 2 valandas, abu buvo statistiškai panašūs.

Šie rezultatai patvirtina, kad priešgrybelinis aktyvumas C. winterianus eterinis aliejus yra susijęs su kišimusi į vientisumą ir funkcionalumą T. mentagrophytes ląstelės membrana. Dėl lipofilinių eterinių aliejų savybių jie gali skaidyti grybelių membranas į lipidus, todėl jie tampa pralaidesni, pažeidžia jų vientisumą ir galiausiai sukelia grybelio mirtį (Sikkema). ir kt., 1995 Cox ir kt., 2000 Burt ir kt., 2004). Todėl šio tyrimo rezultatai gali būti laikomi svarbiais ir perspektyviais. Apibendrinant, šie rezultatai patvirtina racionalų naudojimą C. winterianus eterinis aliejus dermatofitų augimui stabdyti. Be to, C. winterianus eterinis aliejus gali paskatinti ateities pokyčius, susijusius su galimu racionaliu jo panaudojimu dermatofitozės gydymui.

Autoriai norėtų padėkoti CNPq (Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - Brazilija) už dotacijas ir stipendijas.


Žiūrėti video įrašą: Jotvingių grybavimo varžybos (Gruodis 2022).