Informacija

1.19: Agaro plokštelių išpylimas – biologija

1.19: Agaro plokštelių išpylimas – biologija


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Mokymosi tikslai

Tikslai:

  • Išmokite aseptikos technikos pagrindų.
  • Išmokite paruošti sterilias agaro lėkštes bakterijoms auginti

Studentų mokymosi rezultatai:

Baigę šią laboratoriją, studentai galės:

  • Praktikuokite aseptikos techniką.
  • Sterilizuokite ir užpilkite agaro plokšteles rankomis

Įvadas

Mikrobai yra visur aplink mus. 4 laboratorijoje mūsų klasė atrinko įvairius paviršius ir nustatė, kad mikrobai lengvai randami visur aplinkoje. Naudojome sterilias agaro plokšteles, kurios aprūpino maistines medžiagas ir tinkamą pH bakterijoms augti. Šioje laboratorijoje mokysitės gaminti šias sterilias agaro plokšteles.

Agaras yra polisacharidas, gautas iš raudonųjų dumblių. Agaro milteliai pirmiausia ištirpinami verdančiame skystyje, o po to atvėsinami, kad susidarytų želatinė kieta matrica. Kadangi mikrobai negali virškinti agaro, ši medžiaga dažniausiai naudojama laboratorijose maistinėms medžiagoms, kurių reikia bakterijoms, laikyti.

Čia pateikiamos pagrindinės agaro plokštelių pylimo instrukcijos. Tačiau yra daug skirtingų receptų, kaip paruošti bakterijų auginimo terpę, nes kai kurioms bakterijų rūšims reikia skirtingų maistinių medžiagų derinių. Kai kurios paprastosios agaro rūšys yra kraujo agaras, Luria Bertani (LB) agaras, MacConkey agaras, maistinių medžiagų agaras (NA) ir triptinis sojų agaras (TSA). Vykdykite konkrečias pakuotės instrukcijas, susijusias su miltelių ir vandens kiekiais, naudojamais jūsų auginamai terpei. 1 litro LB agaro receptas yra 9,1 g triptono, 4,6 g mielių ekstrakto, 4,6 g NaCl ir 13,7 g agaro. Jei terpės recepte reikalingas antibiotikų priedas, jis pridedamas po to, kai sterilizuotas agaras atšaldomas iki 60 ° C, kad būtų išvengta denatūracijos.

An autoklave yra aukšto slėgio aparatas, kurį laboratorijos, stomatologai ir ligoninės naudoja įrangai, instrumentams, stikliniams indams, augimo terpėms, skysčiams ir biologiškai pavojingoms atliekoms sterilizuoti. Autoklavas 15-20 minučių taiko aukštą slėgį (15 psi) ir prisotintus garus 121oC (250oF) temperatūroje, kad sunaikintų mikrobus ir sporas. Po to, kai terpė pereina šį ciklą, ji yra sterili. Prieš pridedant antibiotikų ir pilant į sterilius Petri lėkštes, atvėsinkite iki 60-65oC.

Medžiagos

  • dezinfekcinis purškalas
  • popieriniai rankšluosčiai
  • Petri lėkštelės
  • pirštines
  • LB agaro milteliai
  • Pasverkite valtį
  • Maišymo baras
  • 500 ml buteliukas su autoklavu
  • Autoklavo juosta
  • Sharpie žymeklis (spalvotas)
  • Dejonizuotas arba distiliuotas vanduo
  • Elektroninis balansas
  • Autoklavas arba greitpuodis
  • Metalinis padėklas
  • Ampicilinas arba arabinozė

Procedūra

Žiniasklaidos rengimas

  1. Ant švaraus stiklo autoklavuojamo 500 ml talpos buteliuko paženklinkite terpės pavadinimą, datą ir inicialus.
    • Pastaba: užpildykite butelį tik iki pusės, kad išvengtumėte perpildymo kaitinant autoklave.
  2. 500 ml buteliukui apskaičiuokite miltelių pavidalo terpės svorį, reikalingą 250 ml. Atimkite tai iš 250, kad nustatytumėte įpilamo vandens tūrį.
  3. Į butelį įpilkite __ ml distiliuoto vandens.
  4. Į tą patį butelį įpilkite __ g terpės su agaro milteliais. (iš viso turi būti 250 ml)
  5. Įdėkite maišymo juostą (nebūtina). Maišykite arba purtykite, kol visiškai susimaišys, ir patikrinkite, ar nėra gabalėlių.
  6. Ant dangtelio ar butelio pridėkite autoklavo juostos gabalėlį ir atlaisvinkite dangtelį per pusę apsisukimo. Jei naudojate talpyklą be dangtelio, laisvai uždenkite aliuminio folija

Autoklavo nustatymas

  1. Paruoštus spausdinimo medžiagos butelius sudėkite į metalinį dėklą.
  2. Įpilkite distiliuoto vandens, kol jis padengs padėklo dugną; apie 1-2 cm gylio.
  3. Įdėkite į autoklavą.
  4. Autoklavas 121oC 15 minučių esant 15 psi.
  5. Kai ciklas bus baigtas, dėvėkite karščiui atsparias pirštines, kad išimtumėte dėklą ir butelius iš aparato.
  6. Leiskite buteliams atvėsti iki maždaug 60oC.

Darbo vietos paruošimas:

  1. Kad aplinka būtų kuo sterilesnė, kad neužterštumėte terpės ir plokštelių, dėvėkite laboratorinį chalatą ir pirštines, o visus paviršius nuvalykite dezinfekavimo priemone arba servetėlėmis.
  2. Tai apima stalviršius ir kraštus, pirštines, žirkles, nuolatinius žymeklius ir kt.
  3. Būtinai nuvalykite pirštines, jei jos palietė kitą dezinfekuotą paviršių (pvz., Jei palietėte veidą, ranką, kėdę ir pan.).
  4. Jei yra, naudokite Bunsen degiklius ir atsargiai pilkite šalia atviros liepsnos, kad geriau išvengtumėte ore sklindančių teršalų.
  5. Kai vieta dezinfekuojama, išimkite sterilius Petri lėkštes. Sterilius indus laikykite uždarytus.
  6. Pakelkite maišelį vertikaliai.
  7. Norėdami išsaugoti lėkštės maišelį pakartotiniam naudojimui saugojimui, nekreipkite dėmesio į bet kokias „Tear Here“ žymes ir nuplėškite mažą kampą nuo maišelio viršaus. Įdėkite pusę žirklių į šią angą ir supjaustykite išilgai maišo raukšlės.
  8. Apverskite visą plokščių krūvą aukštyn kojomis, o išpjauta anga - pačioje kamino apačioje.
  9. Švelniai spauskite žemyn, kartu sukdami maišelį aukštyn.
  10. Sulenkite arba susukite tuščią maišelį ir atidėkite, kad galėtumėte iš naujo supakuoti.

Plokščių dryžavimas

  1. Norėdami greitai atskirti plokštes, kurios turi panašią išvaizdą, galite naudoti juostos kodą. Įvairių spalvų nuolatinių žymeklių derinys gali reikšti skirtingus priedus prie lėkštės. Pavyzdžiui, žalia juostelė gali reikšti, kad į tos plokštelės terpę buvo pridėta ampicilino - tam tikro tipo antibiotikų. Juostelių kodai būdingi konkrečiai laboratorijai, todėl visada dar kartą patikrinkite kodo raktą.
  2. Norėdami ištrinti plokštelę, viršutinė IR apačia turi būti pažymėta kodu.
  3. Paimkite žymeklį su spalva, esančia mygtuke, o lėkščių šūsnį be maišelio ranka švelniai paspauskite krūvos viršų.
  4. Nubrėžkite liniją tiesiai žemyn nuo viršutinio krašto iki kiekvienos kamino plokštės pagrindo.
  5. Jei tai padarysite greitai, gali tekti grįžti ir perbraižyti liniją apatiniame pagrinde.
  6. Jei juostos kodas turi kitą eilutę ar spalvą, pakartokite procesą pridėdami kitą eilutę.
  7. Antrosios eilutės atstumas turi būti 1 cm atstumu nuo pirmosios.
  8. Kartokite procesą, kol juostelės kodas bus baigtas.

Plokščių pylimas

  1. Kai terpė atvės iki 60 o C, skystas tirpalas yra paruoštas pilti.
  2. Šiuo metu į terpę galima įpilti antibiotiko (pvz., Ampicilino) ir švelniai sukti arba maišyti, kad susimaišytų. Pastaba: nepridėkite antibiotiko, jei skystis yra karštesnis nei 60 o C, nes antibiotikas būtų denatūruotas.
  3. Atsukite laikmenos buteliuką ir laikykite buteliuką dominuojančioje rankoje. Pastaba: atidarius buteliuką, nekalbėkite. Kalbėjimas leis bakterijoms iš burnos patekti į orą ir užteršti terpę.
  1. Dangtelį galima laikyti toje pačioje rankoje (tarp pirštų) kaip ir buteliuką arba uždėti ant dezinfekuoto paviršiaus.
  2. Suimkite lėkštę kita ranka ir stumkite ją link stalo krašto, laikydami ją uždarytą.
  3. Kai plokštė yra krašte, atidarykite dangtį, tarsi viename gale būtų įsivaizduojamas vyris; taigi lėkštė atsidaro kaip kiaurasamtis.
  4. Supilkite terpę į plokštelės dugną, kol ji tik padengs paviršių. Neperpildykite.
  5. Uždarykite dangtį ir leiskite atvėsti. Žiniasklaida bus tvirta.
  6. Jei įmanoma, palikite lėkštes vieną dieną, kad kondensatas išgaruotų iš plokštelės. Galite per naktį įdėti plokštes į 25 ° C inkubatorių.
  7. Sudėkite plokštes su tos pačios rūšies laikmenomis ir stumkite plastikinę rankovę virš viršaus.
  8. Apverskite krūvą ir užklijuokite plastikinę įvorę maskavimo juosta.
  9. Pažymėkite juostą, nurodydami laikmenos tipą, pagaminimo datą ir šūsnį pagaminusio asmens vardą ir pavardę.
  10. Sandarias rietuves laikykite šaldytuve iki naudojimo.

STUDIJŲ KLAUSIMAI

  1. Koks tipiškas agaro kiekis yra 1 l terpės?
  2. Kodėl reikia imtis tokių atsargumo priemonių dezinfekuojant erdvę ir vengti veiksmų, dėl kurių bakterijos ir pelėsiai gali patekti į orą? Koks terminas taikomas šioms atsargumo priemonėms ir procedūroms?
  3. Ar agaras aprūpina maistinėmis medžiagomis bakterijas?
  4. Kodėl negalite įtraukti ampicilino į žiniasklaidą prieš jį autoklavuojant?
  5. Kodėl sukietėjusias plokšteles turite palikti vieną dieną, kol jas sandariai uždarysite ir atšaldysite?