Informacija

Santykinė densitometrija iš SDS PAGE

Santykinė densitometrija iš SDS PAGE


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Norėčiau atlikti densitometriją Coomassie dažytame SDS PAGE gelyje, kad būtų galima palyginti rekombinantinio baltymo ekspresijos lygius dviem sąlygomis. Aš naudoju „BioRad“ „Image Lab“ programinę įrangą.

Mano klausimai yra apie tai, kokius įvertinimus galima atlikti, atsižvelgiant į tai, kad Coomassie dažymas gali būti netiesinis, turi baltymų ir baltymų kintamumą. Deja, neturiu standartinės kreivės, o juostose yra viso lizato.

  1. Ar galiu juostos tūrio procentą palyginti su juostos tūriu, įvertindamas visos ląstelės baltymų masės procentą? (25%, palyginti su 20% visų ląstelių baltymų)

  2. O gal tikslingiau paimti juostos tūrį, normalizuotą į savavališką lizato juostą, ir tada pranešti apie procentinį skirtumą tarp sąlygų? (6 vs 4,8 normalizuotas juostos garsumas arba 20% sumažėjęs išraiškos lygis).


Rekombinantinių baltymų kiekybinio nustatymo pagal densitometriją protokolas

Susana María Alonso Villela, TBI, CNRS, INRAE, INSA, Tulūzos universitetas, Tulūza, Prancūzija.

Laboratoire des Venins et Molécules Thérapeutiques, Institut Pasteur de Tunis, Université Tunis El Manar, Tunisas, Tunisas

Venora Laboratoire des Molécules Thérapeutiques, Pasteur de Tunis institutas, Tunis El Manar universitetas, Tunisas, Tunisas

Tuniso fakultetas, Tuniso universiteto universitetas, Tunisas, Tunisas

TBI, CNRS, INRAE, INSA, Tulūzos universitetas, Tulūza, Prancūzija

TBI, CNRS, INRAE, INSA, Tulūzos universitetas, Tulūza, Prancūzija

TBI, CNRS, INRAE, INSA, Tulūzos universitetas, Tulūza, Prancūzija

TBI, CNRS, INRAE, INSA, Tulūzos universitetas, Tulūza, Prancūzija

Susana María Alonso Villela, TBI, CNRS, INRAE, INSA, Tulūzos universitetas, Tulūza, Prancūzija.

Venora Laboratoire des Molécules Thérapeutiques, Pasteur de Tunis institutas, Tunis El Manar universitetas, Tunisas, Tunisas

Venora Laboratoire des Molécules Thérapeutiques, Pasteur de Tunis institutas, Tunis El Manar universitetas, Tunisas, Tunisas

Tuniso medicinos fakultetas, Tuniso El Manaro universitetas, Tunisas, Tunisas

TBI, CNRS, INRAE, INSA, Tulūzos universitetas, Tulūza, Prancūzija

TBI, CNRS, INRAE, INSA, Tulūzos universitetas, Tulūza, Prancūzija

TBI, CNRS, INRAE, INSA, Tulūzos universitetas, Tulūza, Prancūzija


Kaip veikia SDS-PAGE?

Elektroforezė yra pagrindinis būdas atskirti baltymus ir kitas medžiagas, tokias kaip nukleorūgštys, purinai, pirimidinai, kai kurie organiniai junginiai ir net neorganiniai jonai. Dauguma dabartinės elektroforezės yra mėginio atskyrimas į judriąją fazę imobilizuotoje terpėje. Poliakrilamido gelis yra viena iš pagrindinių terpių. Tai porėtas gelis, kurio porų dydis yra artimas baltymų molekulių dydžiui, o tai pagerina baltymų skiriamąją gebą. Be to, poliakrilamido gelis pasižymi geru cheminiu stabilumu, stipriu pakartojamumu, stabilumu pH ir temperatūros pokyčiams bei lengvu spalvų stebėjimu. SDS poliakrilamido gelio elektroforezė (SDS-PAGE) turi paprasto veikimo ir gero atkuriamumo privalumus nustatant baltymų molekulinę masę, aptinkant specifinius baltymus ir identifikuojant padermių rūšis.

Poliakrilamido gelis sudarytas iš akrilamido ir kryžminio ryšio agento N, N'-metilenbisakrilamido, veikiant katalizatoriams amonio persulfatas (AP) ir N, N, N', N'-tetrametiletilendiaminas (TEMED). Tai gelis, turintis trimatę tinklo struktūrą. PAGE gali atskirti baltymus į kelias juostas pagal skirtingą mobilumą, kurį sukelia skirtingas baltymų molekulių krūvis ir molekulinė masė. SDS yra anijoninė paviršinio aktyvumo medžiaga, galinti nutraukti vandenilio ir hidrofobines baltymų jungtis esant redukuojantiems agentams (β-merkaptoetanoliui arba ditiotreitoliui, DTT) ir tam tikru santykiu jungiasi su baltymų molekulėmis, sudarydama trumpus lazdelės formos kompozitus. toks pat tankis. Teigiamai koreliuoja su baltymo molekuline mase, skirtingo molekulinio svorio baltymų suformuoto komplekso ilgis yra skirtingas. Dėl SDS neigiamo krūvio baltymo kiekis gerokai viršija pradinį krūvį, užmaskuodamas natūralų krūvio skirtumą tarp įvairių baltymų molekulių. Todėl įvairių baltymų-SDS kompleksų mobilumas elektroforezės metu nebeturi įtakos pradiniam krūviui ir molekulinei formai, o priklauso tik nuo santykinės molekulinės masės.

Poliakrilamido gelis paprastai susideda iš kraunamojo gelio viršutiniame sluoksnyje ir atskyrimo gelio apatiniame sluoksnyje. Skirtumas tarp viršutinio ir apatinio gelio yra akrilamido koncentracija ir Tris-HCl pH. Elektroforezės metu ant gelio veikiamas elektrinis laukas, o neigiamo krūvio baltymai migruoja per gelį nuo neigiamo elektrodo iki teigiamo elektrodo. Dažniausiai elektroforezės buferį sudaro Tris ir glicinas. Stacking gelio pH yra 6,8, ir tik kelios glicino molekulės atsiskiria. Todėl SDS apdorotos baltymų molekulės juda tarp viršutinės glicino molekulės ir apatinės Cl-jonų. Šis procesas suspaudžia gelyje esantį baltymų mėginį į juostas, kurios yra daug mažesnės už pradinį tūrį. Vykstant elektroforezei, baltymas pereina į atskyrimo gelį (pH 8,8), kuriame glicino molekulės disocijuoja. Judėjimo greitis didėja ir viršija baltymą. Atskyrimo gelyje kiekvieno baltymo judėjimo greitis priklauso nuo jo molekulinės masės. Mažos molekulinės masės baltymai gali lengvai prasiskverbti pro gelio poras, o didelės molekulinės masės baltymai prasiskverbia pro poras. Po tam tikro laiko baltymai pasiekia skirtingus atstumus pagal dydžius, pasiekdami baltymų atskyrimo tikslą.

1 pav. Scheminė poliakrilamido gelio elektroforezės schema (Gülay, ir kt, 2018).

Kaip nustatyti baltymų molekulinę masę naudojant SDS-PAGE?

SDS-PAGE yra pagrindinis metodas nežinomų baltymų molekulinei masei nustatyti. Vienu metu elektroforezuojamas baltymas, kurio molekulinė masė žinoma, ir nežinomas mėginys. Po dažymo, pagal santykinį standartinio baltymo judrumą ir molekulinės masės logaritmą, galima gauti liniją ir nustatyti nežinomo mėginio molekulinę masę naudojant jo santykinį mobilumą. Laboratorijoje standartinis molekulinės masės baltymas, kovalentiškai sujungtas su dažikliu, naudojamas kaip etaloninis baltymas, kad būtų galima apytiksliai nurodyti nežinomo baltymo dydį. Šis iš anksto nudažytas baltymo žymeklis gali būti tiesiogiai stebimas elektroforezės metu arba perkeliant membranas.

Kaip skaityti SDS-PAGE rezultatus?

Po elektroforezės baltymų atskyrimo negalima tiesiogiai stebėti plika akimi, todėl reikalingi tolesni dažymo metodai. Coomassie briliantinio mėlynumo dažymas ir dažymas sidabru yra įprasti metodai, skirti įprastiniam elektroforezės būdu atskirtų baltymų aptikimui ir kiekybiniam įvertinimui. Po paprasto apdorojimo, pavyzdžiui, fiksavimo, dažymo ir spalvos pašalinimo, galima aiškiai pastebėti baltymų pasiskirstymą. Tobulinus didelio jautrumo baltymų analizės metodus ir baltymų identifikavimo technologijas, nauji dažymo metodai, tokie kaip fluorescencinis žymėjimas ir izotopų ženklinimo technologija, labai pagerino jautrumą ir taip pat yra suderinami su automatizuota proteomo platformos gelio pjovimo technologija. Sukurtos didesnio jautrumo ir automatinio dažymo technologijos.

Kaip laikyti SDS-PAGE gelį?

Prieš kiekvieną eksperimentą paprastai paruošiami šviežiai SDS-PAGE geliai. Tačiau gelius galima laikyti ir švariame 4°C vandenyje maždaug savaitę. Jei po dažymo gelio nepavyksta laiku nufotografuoti, jį reikia įdėti į vandenį, kad gelis neišdžiūtų ir nesusitrauktų. Dažymo rezultatus patariama nufotografuoti kuo greičiau. Juosta išsisklaidys, jei gelis ilgą laiką bus mirkomas vandenyje.

Nuorodos
1. Smith B J. SDS poliakrilamido gelio baltymų elektroforezė. Molekulinės biologijos metodai, 1984, 1(4):41-55.
2. Duffy M F, Noormohammadi A H, Baseggio N, ir kt. Viso ląstelių baltymų atskyrimas poliakrilamido gelio-elektroforezės būdu. Molekulinės biologijos metodai, 1998, 104:267.

Pateikite išsamų savo projekto aprašymą. Mes pateiksime jums pritaikytą projekto planą, kad atitiktume jūsų tyrimų užklausas. Taip pat galite siųsti el. laiškus tiesiogiai adresu.


Akrilamido koncentracija lemia spiralinės membranos baltymo gelio poslinkių kryptį ir dydį

SDS/PAGE yra visuotinai naudojamas biochemijoje, ląstelių biologijoje ir imunologijoje, kad būtų galima lengvai pašalinti nedidelį baltymų kiekį iš audinių ir ląstelių ekstraktų. Nors vandenyje tirpių baltymų molekulinės masės patikimai nustatomos pagal jų SDS/PAGE mobilumą, dauguma spiralinių membranų baltymų, kurie sudaro 20–30 % žmogaus genomo ir daugumą vaistų taikinių, migruoja į pozicijas, kurios dešimtmečius buvo nenuspėjamai lėtesnės. arba greitesnis už tikrąjį formulės svorį, todėl dažnai sunku nustatyti jų tapatybę. Naudodami de novo sukurtus transmembraninius mimetinius polipeptidus, atitinkančius spiralinių membraną apimančių sekų sudėtį, kiekybiškai įvertiname anomalų SDS / PAGE spiralinių membranų baltymų frakcionavimą, palygindami santykinį šių polipeptidų mobilumą su tipiniais vandenyje tirpiais etaloniniais baltymais ant Laemmli gelių. Mes pastebime, kad tiek grynųjų krūvių, tiek efektyvių molekulinių dydžių migruojančių transmembraninių mimikų rūšių dalelės viršija atitinkamų etaloninių baltymų ir kad gelio akrilamido koncentracija diktuoja šių dviejų veiksnių įtaką nenormalios migracijos krypčiai ir dydžiui. Algoritmai, kuriuos gavome iš šių duomenų, kompensuoja skirtingą akrilamido koncentracijos poveikį įvairių natūralių membraninių baltymų SDS / PAGE mobilumui. Mūsų rezultatai yra unikali priemonė numatyti anomalią membraninių baltymų migraciją, taip palengvinant tiesioginį jų molekulinio svorio nustatymą naudojant SDS/PAGE.

Raktažodžiai: matomo dydžio gelio mobilumas imunoblotuojantis baltymų identifikavimas baltymų migracija.

Interesų konflikto pareiškimas

Autoriai pareiškia, kad nėra interesų konflikto.

Figūros

TM-mimetikai perjungia migracijos pozicijas santykinai ...

TM-mimetikai keičia migracijos pozicijas, palyginti su etaloniniais baltymais SDS/PAGE, esant įvairiam akrilamidui ...

Molekulinis dydis ir grynasis krūvis…

TM-mimetikų molekulinis dydis ir grynasis krūvis yra didesni nei etaloniniai…

SDS / PAGE mobilumo poslinkiai TM mimetikų...

TM-mimetikų SDS/PAGE mobilumo poslinkiai, palyginti su etaloniniais baltymais. ( A ir B…


Standartinės molekulinės masės kreivės pavyzdys

Gelių baltymų standartai yra išgryninti polipeptidai, kurių santykinis judrumas labai atitinka jų tikrąją molekulinę masę. Elektroforezės cheminių medžiagų tiekėjai, tokie kaip SIGMA (Sent Luisas, MO) arba „Bio-Rad“ (Hercules, Kalifornija), pateikia paruoštus molekulinės masės standartus. SIGMA parduoda standartus, skirtus kalibruoti SDS gelius su tris pagrindu veikiančia buferine sistema (Laemmli geliai).

Įdėklai su komerciniais standartais, senesnė literatūra ir net mano seni tinklalapiai gali nurodyti molekulinę masę (MW), o ne molekulinę masę. MW yra tokia pati kaip santykinė molekulinė masė (Mr), bet skiriasi nuo molekulinės masės tuo, kad yra dydis be vieneto. Tikėtina, kad rasite MW duomenis, kurie pateikiami „Daltons“ arba „kiloDaltons“, nors toks naudojimas nėra teisingas. Skaičius, reiškiantis MW, yra identiškas atitinkamai molekulinei masei Daltonuose, todėl terminai gali būti vartojami pakaitomis tol, kol vienetai nukrenta iš kiekių, kurie pavaizduoti kaip MW.

SIGMA standartinis mišinys, kurio molekulinė masė yra 30 000–200 000 (SDS6H2)

  • miozino iš kiaulių raumenų, 200 tūkst
  • beta-galaktozidazė, iš Escherichia coli, 116,000
  • fosforilazė B, iš triušio raumenų 97 400
  • albuminas, galvijai 66 000
  • albuminas, iš vištienos kiaušinio baltymo 45 000
  • karboanhidrazės iš galvijų eritrocitų, 29 000

SIGMA Dalton Mark VII-L standartinis mišinys, MW diapazonas 14 000–70 000 (SDS-7)

  • albuminas, galvijai 66 000
  • albuminas, iš vištienos kiaušinio baltymo 45 000
  • glicerraldehido-3-fosfato dehidrogenazė, iš triušio raumenų 36 000
  • karboanhidrazės iš galvijų eritrocitų, 29 000
  • tripsinogeno, iš galvijų kasos 24 tūkst
  • tripsino inhibitorius, sojos pupelės, 20 100
  • alfa-laktalbuminas, galvijų pienas 14 200

Atminkite, kad baltymų šaltiniai yra įvairūs. Visų jų nerasite vienoje baltymų frakcijoje, iš tikrųjų greičiausiai nerasite nė vieno iš jų, priklausomai nuo jūsų tiriamos frakcijos. Jie naudojami geliams kalibruoti, o ne kaip rodikliai, kokie yra baltymų tipai. Atminkite, kad daugelis labai skirtingų baltymų turi panašią molekulinę masę. Standartinių mišinių suteikiami modeliai tampa atpažįstami su patirtimi.

Žemiau parodytas tipinis standartų molekulinių masių ir jų santykinio judrumo grafikas, naudojant molekulinių masių logaritminę skalę. Būkite labai atsargūs su kreivių pritaikymais, turėdami omenyje, kad skalė yra logaritminė. Jūs nenorite klysti šalia gelio viršaus. Gali būti geriau tiesiog interpoliuoti rezultatus (sujungti duomenų taškus).

Santykinis tam tikro polipeptido mobilumas skirsis priklausomai nuo gelio tankio (%T). Kreivės visada pasikeis, kai pasikeis akrilamido procentas.

Naudojant kai kuriuos gelius, kuriuose yra daug akrilamido, dažų priekis nebus akivaizdus, ​​nes baltymų, kurie yra pakankamai maži, kad galėtų judėti taip pat, kaip ir bromfenolio mėlynasis dažiklis, gali nebūti. Jei prieš dažymą nebuvo pažymėta dažų priekio padėtis, tikrojo santykinio mobilumo nustatyti negalima. Kol gelis yra kalibruojamas naudojant vidinius standartus, MW apskaičiavimus galima gauti vaizduojant santykinį migracijos atstumą, naudojant savavališką atskaitos tašką, pvz., Gelio dugną. Tikrojo santykinio mobilumo naudojimas leidžia naudoti tą pačią standartinę kreivę bet kuriam tos pačios sudėties geliui, neatsižvelgiant į dažų priekio matmenis ar padėtį, kai elektroforezė baigiama. Klaida apskaičiuojant MW padidėja naudojant savavališką atskaitos tašką, kai pradinis dažų frontas buvo išlenktas arba kitaip iškraipytas.


Dirbant su pavojingomis medžiagomis svarbu atkreipti dėmesį į specifinį šių medžiagų keliamą pavojų. Tai taip pat reiškia, kad norint veiksmingai taikyti atsargumo priemones, svarbu identifikuoti ir atskirti vieną pavojingą medžiagą nuo kitos. Vadovams, vadovams ir jų darbuotojams būtina mokėti skaityti SDS.

Sveikatos ir saugos specialistai žino, kad gebėjimas suprasti ir perskaityti saugos duomenų lapą (SDS) yra pagrindinis įgūdis bet kurioje darbo vietoje, kuriai reikia darbuotojų saugos.

Nors pasauliniu mastu suderintoje sistemoje reikalingas visas 16 skilčių SDS, ne kiekviename skyriuje pateikiama tokia pati informacija, kurios reikės darbuotojui ar saugos vadovui. Šiame straipsnyje aptarsiu skyrių, susijusį su pavojais, susijusiais su medžiagų naudojimu/tvarkymu. Suprasdami šiuos skyrius, turėsite galimybę imtis tinkamų prevencinių ir apsaugos priemonių, kad sumažintumėte sužalojimo riziką.

Jei ieškote informacijos apie tai, kaip perskaityti SDS reagavimo į nelaimes priemones, galite perskaityti šį susijusį straipsnį „Viskas, ką reikia žinoti apie saugos duomenų lapus (SDS) nelaimės atveju“.

Tolesniuose GHS saugos duomenų lapo skyriuose pateikiama informacija apie medžiagos keliamą pavojų ir specifines savybes, kurios gali būti naudojamos medžiagai identifikuoti:

  • 1 skirsnis. Cheminis produktas ir tiekėjo identifikavimas
  • 2 skyrius. Pavojų identifikavimas
  • 3 skyrius. Sudėtis/informacija apie sudedamąsias dalis
  • 9 skyrius. Fizinės ir cheminės savybės

1 skyrius. Cheminis produktas ir tiekėjo identifikavimas

Šiame skyriuje pateikiama bendra informacija apie medžiagą ir tiekėją. Tai apima visas produkto identifikavimo priemones (pvz., produkto kodą, gaminio pavadinimą). Šios identifikavimo priemonės suteiks atskaitos tašką tarp etiketės ir SDS, leidžiančios vartotojui greitai rasti tinkamą SDS, jei prireiks prieigos prie jo.

Šiame skyriuje taip pat pateikiama informacija ir skubios pagalbos kontaktinė informacija, skirta vartotojui gauti bet kokios papildomos informacijos apie gaminį arba kreiptis pagalbos avarijos atveju.

Galiausiai, šiame skyriuje bus pateikta informacija apie rekomenduojamus medžiagos naudojimo būdus arba bet kokius nerekomenduojamus naudojimo būdus. Ši informacija leidžia vartotojui įsitikinti, kad medžiaga naudojama laikantis gamintojo rekomendacijų.

2 skirsnis: pavojų identifikavimas

Šiame skyriuje aprašomi su medžiaga susiję pavojai ir pavojai. Taip vartotojui pranešama, kokiu būdu ši medžiaga gali būti pavojinga, taip pat pateikiamos bendros saugaus medžiagos naudojimo gairės. Tai taip pat skyrius, kuriame galima rasti elementus, kuriuos reikia rodyti etiketėje.

Šiame skyriuje pateikiama ši informacija:

  • GHS pavojaus klasifikacija
  • Piktogramos
  • Signalinis žodis
  • Pavojaus pareiškimai
  • Atsargumo frazės
  • Kiti pavojai (arba kitaip neklasifikuojami pavojai)

GHS pavojaus klasifikacijos toliau skirstomos į fizinius pavojus, pavojus sveikatai ir pavojus aplinkai. Šios klasifikacijos leidžia vartotojui žinoti ir stebėti tuos pavojus. GHS pavojingumo klasifikacijose išvardytos klasifikacijos nustato visą informaciją, pateiktą likusioje šio skyriaus dalyje, išskyrus kitus pavojus (arba kitaip neklasifikuojamus pavojus).

Piktograma, signalinis žodis ir pavojaus pareiškimai suteikia vartotojui greitą nuorodą ir pavojų aprašymą. Piktogramos vizualiai vaizduoja medžiagos pavojų pobūdį, signalinis žodis pavojaus sunkumą nurodo vienu žodžiu (įspėjimas arba pavojus), o pavojaus teiginiai vienu trumpu sakiniu apibūdina kiekvieno pavojaus poveikį (pvz., H300 - mirtinas) prarijus). Čia pateikiamas glaustas ir veiksmingas aprašymas, į ką vartotojas turėtų atkreipti dėmesį naudodamas šią medžiagą.

Atsargumo frazes galima suskirstyti į šias kategorijas:

  • Bendrosios atsargumo frazės
  • Atsargumo frazės, susijusios su prevencinėmis priemonėmis
  • Atsargumo frazės, susijusios su reagavimu į incidentą
  • Atsargumo frazės, susijusios su laikymo sąlygomis
  • Atsargumo frazės, susijusios su medžiagos šalinimu.

Šios standartizuotos frazės yra bendros gairės, kaip sumažinti riziką, reaguoti į incidentus iš anksto teikiant pirmosios pagalbos ar priešgaisrinius patarimus bei tinkamai laikyti ir utilizuoti medžiagą.

Paskutinė šio skyriaus kategorija yra kiti pavojai. Tai taip pat gali būti vadinama kitaip neklasifikuojamais pavojais. Šioje kategorijoje nurodomi visi papildomi pavojai, kurių neapima GHS, pvz., dulkių sprogimo ar biologinio pavojaus pavojus.

3 skyrius: Sudėtis/informacija apie sudedamąsias dalis

Šiame skyriuje pateikiama medžiagos cheminė sudėtis. Tai apima cheminį pavadinimą, CAS numerį ir pavojingų cheminių medžiagų koncentraciją ar koncentracijos diapazoną. Tai leidžia vartotojui nustatyti, kurios cheminės medžiagos yra pagrindinės GHS pavojaus klasifikacijos medžiagos, ir įgyvendinti specialias procedūras ar apsaugos priemones, skirtas šiems pavojams sušvelninti.

Be to, į 3 skirsnį galima įtraukti grynos cheminės medžiagos GHS klasifikacijas, taip pat kitas identifikavimo priemones, pvz., EB numerį arba kitus registracijos numerius.

9 skyrius. Fizinės ir cheminės savybės

Šiame skyriuje pateikiamos aprašomosios fizinės ir cheminės medžiagos savybės. Tai leidžia vartotojui identifikuoti medžiagą netinkamo antrinio konteinerio ženklinimo ar išsiliejimo atvejais ir leidžia vartotojui įsitikinti, kad naudojamas produktas atitinka tiekėjo pateiktą aprašymą. Bet koks reikšmingas nukrypimas nuo šio aprašymo gali reikšti, kad medžiagoje kažkas negerai arba visai kita medžiaga. Čia pateikiamas dažniausiai išvardytų nekilnojamojo turto objektų sąrašas ir kaip ši informacija gali būti naudojama siekiant padidinti darbo vietos saugumą.

Tankis

Tai yra tam tikro tūrio medžiagos masės matas. Tai taip pat galima rasti kaip „Santykinis tankis“ arba „Savitasis tankis“, kurie abu yra medžiagos tankis, padalytas iš vandens tankio.

Ši savybė parodys, kaip ši medžiaga elgsis su kitomis medžiagomis (pvz., Mažesnis tankis nei vanduo rodo, kad medžiaga sklandytų ant vandens). Tai gali būti labai naudinga išsiliejimo atvejuNaudotojas gali nuspėti, ar ši medžiaga bus ant paviršiaus, tarpinio sluoksnio ar nuslūgs į mišinio dugną, remiantis visų susijusių medžiagų tankiu.

Išvaizda

Tai vaizdinis medžiagos aprašymas, įskaitant fizinę būseną, spalvą ir konsistenciją. Tai suteikia vartotojui nuorodą vizualiai patvirtinti medžiagos tapatybę.

Tai taip pat gali padėti vizualiai atpažinti nepažymėtą ar išsiliejusią medžiagą.

Kvapo aprašymas ir slenkstis

Taip aprašomas numatomas medžiagos kvapas ir garų koncentracija, prie kurios žmogus paprastai pradėtų aptikti tą kvapą. Tai yra papildoma informacija, leidžianti identifikuoti gaminį ir pateikti garo koncentracijos įvertinimo pagal kvapą etaloną.

Kitaip tariant, žinodamas kvapo aprašymą ir slenkstį, vartotojas gali nustatyti, ar medžiagos ore yra pavojingo lygio (remiantis 8 skyriuje išvardytais leistinais poveikio lygiais).

Tirpumas vandenyje

Tai aprašymas, kaip gerai medžiaga maišosi su vandeniu. Remdamasis informacija apie šią fizinę savybę, vartotojas gali numatyti numatomą produkto elgseną, jei jis bus sumaišytas su vandeniu (pvz., ar jis sudarys atskirą fazę, ar visiškai ištirps).

Pliūpsnio taškas

Tai temperatūra, kuriai esant šis gaminys užsidegs, kai jį veikia uždegimo šaltinis, pvz., kibirkštis ar liepsna. Pliūpsnio temperatūra suteikia konkretesnės informacijos apie gaminio degumą ir padeda nustatyti, kurie produktai turėtų būti laikomi žemesnėje temperatūroje, kad būtų išvengta gaisro pavojaus.

Užšalimo/virimo temperatūra

Tai temperatūra, kurioje produktas lydosi arba užšąla ir užverda. Jie nurodo temperatūrą, kuriai esant pasikeistų fizinė medžiagos būsena, kuri padeda nustatyti, kuri temperatūra gali būti per žema gaminiui laikyti, nes užšalimas gali pažeisti talpyklas ir sukelti nuotėkį, o kuri temperatūra gali būti per aukšta gaminiui laikyti, todėl iki nuostolių dėl garavimo.

PH

Tai yra skaitinis rūgštingumo ar šarmingumo rodiklis, pagrįstas pH skale. Rūgščių produktų pH yra mažesnis nei 7, o šarminių - daugiau nei 7. Ši fizinė savybė padeda nustatyti, koks gali būti ėsdinantis produktas, ir padeda įvertinti, kurie kiti produktai yra nesuderinami (produktai, kurių pH yra žemas ir aukštas, turėtų būti laikomi atskirai).

Išmokti skaityti SDS: reikalingas mokymas

Kadangi informacija, nurodyta pirmiau pateiktuose SDS skyriuose (be kitų skyrių, kuriuos rasite 16 skyrių GHS SDS), yra svarbi žinant, kaip atpažinti, laikyti ir naudoti cheminį produktą, tai ne tik jūsų atsakomybė teikti savo darbuotojams tikslius ir atnaujintus SDL – pagal OSHA, WHMIS ir CLP reglamentus taip pat privalote tinkamai apmokyti savo darbuotojus, kaip skaityti ir suprasti SDS.

Mokymo taisyklės skiriasi priklausomai nuo jūsų verslą prižiūrinčios sveikatos ir saugos reguliavimo institucijos, tačiau paprastai gairėse reikalaujama:

  • Mokykite darbuotojus apie pasaulinės harmonizuotos sistemos (GHS) standartus.
  • Kaip perskaityti visas 16 SDS dalių.
  • Suteikite prieigą prie SDS kopijų bet kuriai medžiagai, su kuria jie gali susidurti.
  • Teikti SDS pagal federalinius SDS kalbos įstatymus. Jei jūsų darbuotojai negali tinkamai suprasti žodinės anglų kalbos, galite arba nereikalauti, kad mokymai būtų mokomi kita nei anglų kalba (pavyzdžiui, žr. OSHA OSHA 29 CFR 1910.1200(h)).

Kur gauti daugiau informacijos apie SDS atitiktį

Norite sužinoti daugiau apie tai, kas įtraukta į kiekvieną SDS skyrių ir kaip ši informacija atlieka gyvybiškai svarbų vaidmenį siekiant išvengti traumų ir sumažinti riziką? ERA teikia an nemokamas internetinis seminaras pagal pareikalavimą kuri leis jums giliai pasinerti į SDS skyrius, SDS kūrimą ir kaip visa tai susiję su sveikatos ir saugos reikalavimų laikymusi.


Padėkos

CE-SDS ir „Simple Western“ prietaisus ir reagentus pateikė „ProteinSimple“, „Bio-Techne“ prekės ženklas. Norėtume padėkoti Udo Burgeriui, Susanne Doerks ir Chrisui Hegeriui už didžiulę paramą. Norime padėkoti Braunschweig Technische Universität Farmacijos biologijos institutui už vaizdą ir profesoriaus daktaro Oto iš Technische Universität Braunschweig Medicinos ir farmacijos chemijos instituto darbo grupę už tai, kad paskolino mums SDS-PAGE sistemą Bio-Rad. Be to, norėtume padėkoti Žemutinės Saksonijos valstijai už stipendiją Rebecca Wiesner. Už techninę pagalbą ir patarimus dėkojame Holgeriui Zagstui ir Matthiasui Steinui. Norime padėkoti Nordilyn Lorenz už mėginio paruošimą ir daugelio eksperimentų su SDS-PAGE, CE-SDS ir Simple Western atlikimą.

Atviros prieigos finansavimą įgalino ir organizavo „Projekt DEAL“.

Hermann Wätzig mėgsta paminėti, kad ilgą laiką palaiko artimą ir labai draugišką ryšį su ProteinSimple. Autoriai nepaskelbė jokio kito interesų konflikto.

Failo pavadinimas apibūdinimas
elps7314-sup-0001-SuppMat.docx2,2 MB Pagalbinės informacijos failas: Etaloninių MW pagal gamintojo specifikaciją palyginimas su UniProt MW Įvairių mėginių buferių įtaka MW nustatymui 10 % SDS-PAGE Denatūravimo temperatūros įtaka MW nustatymui CE-SDS (n = 3) Denatūracijos temperatūros įtaka MW nustatymui pagal CE-SDS ir Simple Western (n = 3) Reduktorių įtaka MW nustatymui pagal CE-SDS ir Simple Western (n = 3) Matuzumabo CE-SDS atskyrimo elektroferogramos, sumažintos įvairiais reduktoriais ir nesumažintu Matuzumabu Penkių skirtingų gamintojų MW žymenų palyginimas 10% SDS-PAGE, penkių MW žymenų elektroferogramos CE-SDS, tiesinė regresija brėžiniai, pagrįsti MW ir santykiniu migracijos atstumu (Rf), atitinkamai MW žymenų abipusiu santykiniu migracijos laiku (RMT), naudojant „Bio-Rad“ „Precision Plus“ baltymų standarto pavyzdį, „MW Marker Maurice CE-SDS by ProteinSimple“, „ProteomeLab ™ MW“ „Sciex“ dydžio standartas, „New England Biolabs“ „Unstained Protein Standard“ ir „Novex“ „Benchmark ™“ nedažytos baltymų kopėčios pagal gyvybės technologijas.

Atkreipkite dėmesį: leidėjas nėra atsakingas už bet kokios autorių pateiktos pagalbinės informacijos turinį ar funkcionalumą. Visos užklausos (išskyrus trūkstamą turinį) turėtų būti nukreiptos į atitinkamą straipsnio autorių.


Santykinė densitometrija iš SDS PAGE - Biology

Na Apimtis
1 tuščia
2 tuščia
3 5 ul lytiškai plintančios ligos
4 *10 ul A pavyzdys
5 *10 ul B pavyzdys
6 *10 ul C mėginio
7 *10 ul D pavyzdys
8 *10 ul E pavyzdys
9 *10 val
10tuščia

1. Kodėl į žuvies mėginius pridėjote „Laemmli“ mėginio buferį?

Norėdami linearizuoti baltymus, užtikrindami, kad baltymai judėtų tik pagal dydį, taip pat padengdami baltymus, kurie bus įkraunami elektriškai, kad jie migruotų žemyn geliu.

2. Koks buvo mėginių šildymo tikslas?

Toliau denatūruoti baltymus sumažinant disulfidinius ryšius.

3. Kaip iš žuvų mėginių išgaunami baltymai?

Inkubuojant mėgintuvėlius penkias minutes kambario temperatūroje

4. Ar visi baltymai buvo išgauti iš žuvies gabalo, ar kai kurie dar liko po ekstrahavimo? Kaip galėtumėte patikrinti savo hipotezę?

Taip, jų neliko. Šią hipotezę galima patikrinti paleidus antrą SDS PAGE.

1. Kodėl su SDS padengti baltymai juda, kai jie dedami į elektrinį lauką?

SDS suteikia baltymui bendrą neigiamą krūvį, kurio stiprumas yra lygus jo polipeptidinės grandinės ilgiui, todėl mišinys gali judėti pagal dydį arba visai nejudėti.

2. Koks yra aktino ir miozino standartų ir Precision Plus Protein Kaleidoscope standarto tikslas?

Žingsnis prieš gelį. Aktino ir miozino standartai leidžia palyginti pagrindinius konservuotus raumenų baltymus. Tikslumo ir baltymų kaleidoskopo standartas leidžia matyti, kaip baltymai migruoja per gelį.

3. Kurie baltymai migruos toliausiai? Kodėl?

Maži neigiamai įkrauti baltymai migruos toliausiai, nes jie turi mažesnę molekulinę masę.

4. Kokia dėmės paskirtis?

Dėmė sukuria etalonų ir baltymų judėjimą, kad jie judėtų išilgai matomo elektroforezės gelio. Tai leidžia juosteles palyginti su žuvies mėginių standartais.

1. Kurios dvi žuvys turi panašiausius baltymų profilius?

2. Kurios dvi žuvys turi mažiausiai panašius baltymų profilius?

3. Paaiškinkite, kodėl, jūsų nuomone, kai kurių žuvų rūšių baltymų profiliai turi daugiau juostų nei kitų žuvų rūšių?

Šios žuvys vystėsi kitaip nei kitos žuvys.

4. Ar jūsų prognozės iš priešlaborinės veiklos pasitvirtino, ar ne? Jei ne, kodėl manote, kad taip buvo?

Sakėme, kad šamai ir plekšnės buvo glaudžiausiai susiję dėl jų plaukimo tipo ir plaukimo aplinkos. Ši prognozė iš dalies buvo teisinga dėl diagramoje esančių atitikimo juostų, tačiau šamas ir menkė yra labiausiai panašūs.


Porphyra yezoensis Ueda II fotosistemos išskyrimas ir apibūdinimas

Tilakoidinės membranos buvo išskirtos ir išgrynintos iš Porphyra yezoensis Ueda (P. yezoensis) gametofito sacharozės tankio gradiento ultracentrifugavimo būdu. Po to, kai P. yezoensis gametofito tilakoido membranos buvo ištirpintos SDS, fotosistemos II (PSII) dalelės buvo išskirtos ir išgrynintos. PSII dalelių aktyvumas nustatytas DCIP (2,6-dichloroindofenolio) fotoredukcijos reakcija. Išgrynintų PSII dalelių sudėtis buvo aptikta SDS-PAGE. Dėl to buvo rasti septyni baltymai, įskaitant 55 kD baltymus, 47 kD baltymus, 43 kD baltymus, 33 kD baltymus, 31 kD baltymus, 29 kD baltymus ir 18 kD baltymus. Palyginti su aukštesnių augalų PSII dalelėmis ir kitais dumbliais, jie buvo identifikuoti kaip atitinkamai D1/D2 kompleksas, CP47, CP43, 33 kD baltymas, D1, D2 ir cyt c-550. Be to, buvo rasti kiti trys nauji baltymai, atitinkamai 20 kD, 16 kD ir 14 kD. Tarp šių išorinių baltymų anksčiau nebuvo pranešta apie 16 kD ir 14 kD baltymus, o 20 kD baltymas pirmą kartą buvo rastas daugialąsčiuose raudonuosiuose dumbliuose.


Tricinas – SDS-PUSLAPIS

Tricinas-SDS-PAGE dažniausiai naudojamas baltymams atskirti 1–100 kDa masės intervale. Tai yra tinkamiausia elektroforezės sistema, skirta mažesniems nei 30 kDa baltymams atskirti. Geliuose naudojamo akrilamido koncentracijos yra mažesnės nei kitose elektroforezės sistemose. Šios mažesnės koncentracijos palengvina elektroblokavimą, o tai ypač svarbu hidrofobiniams baltymams. „Tricine-SDS-PAGE“ taip pat pirmenybė teikiama dvigubam SDS-PAGE (dSDS-PAGE)-proteominiam įrankiui, naudojamam išskirti itin hidrofobinius baltymus masės spektrometriniam identifikavimui, ir suteikia pranašumų sprendžiant antrąjį matmenį po mėlynojo PAGE ( BN-PAGE) ir aiškaus gimtojo PAGE (CN-PAGE). Čia aprašysiu Tricine – SDS-PAGE protokolą, kuris apima veiksmingus Coomassie mėlynojo arba sidabro dažymo ir elektroblotavimo metodus, taip padidindamas metodo universalumą. Šį protokolą galima užpildyti per 1–2 d.

*Pastaba: iš pradžių internete paskelbtoje straipsnio versijoje 18 puslapyje esančioje lentelėje trūko žodžių „Gelio buferis (3x)“. Klaida buvo ištaisyta visose straipsnio versijose.


Žiūrėti video įrašą: 이다영, 당신이 몰랐던 15가지 사실 (Gruodis 2022).