Informacija

Klaidingas dUTP įtraukimas į DNR?

Klaidingas dUTP įtraukimas į DNR?

We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

OW jX Kl zc AM YJ tg qF qp Om bK ro nA

Uracilas, RNR bazė, DNR buvo pakeistas timinu (kuris turi tą pačią bazių porą su guaninu). Tačiau dTTP (dažniau rašytinio TTP) sintezei reikalingas dUTP:

Kiek dUTP (klaidingai) įtrauktas į DNR?


Toliau bandoma atsakyti į savo klausimą, kurį, manau, svarbu apsvarstyti bendrame SE Biology pranešimų apie uracilą ir timiną DNR ir RNR sintezėje kontekste.

  1. Atrodo, kad dėl mažos dUTP koncentracijos ląstelėse yra mažai klaidingo įtraukimo.

  2. Bet kokį nedidelį netinkamo inkorporavimo kiekį gali sutvarkyti ląstelėse egzistuojanti DNR taisymo sistema.

1 teiginį grindžiu Grogano darbu ir kt., paskelbta m Biochemija 50, 618-627 (2011). Jie parodė, kad tiek pelių, tiek žmogaus ląstelių linijose normali dUTP (ir dUMP) koncentracija buvo maža. aš manyti kad tai turi atspindėti dUTPazės ir timidilato sintazės ląstelių aktyvumą, kuris yra pakankamai didelis, kad būtų pašalintas atitinkamai dUTP ir dUMP, kai jie susidaro. Kai timidilato sintazės aktyvumą slopino vaistai nuo vėžio, šie nukleotidai susikaupė, kaip ir tikėtasi.

Grįsdamas 2 teiginį, remiuosi atskiru ankstesniu Seiple skilimo mielių tyrimu ir kt. Nukleino rūgščių tyrimuose 34, 140-151 (2006). Jie naudojo vaistą 5-fluorouracilą, kad slopintų timidilato sintazę ir nustatė, kad dėl to uracilas netinkamai įsiliejo į DNR ir kartu pažeidė ląsteles. DNR taisymo sistemos vaidmuo mažinant šią žalą buvo parodytas naudojant mutantą Ung1 genas, kuris koduoja DNR glikozilazę – čia toksiškumas ląstelėms buvo daug didesnis.

Nors tarp skirtingų naudojamų sistemų yra tam tikrų neatitikimų ir aiškinimo sunkumų. Manau, kad jie teikia bendrą paramą dviem postulatams. Būtų naudinga, jei būtų galima rasti atitinkamų fermentų kinetikos duomenis, kad būtų galima patikrinti mano prielaidas dėl mažos dUTP koncentracijos priežasties.


Timidino monofosfatas

Timidilato sintezė: Timidilato sintetazė (EC2.1.1.45) metilina 2′-deoksiuridino 5′-monofosfatą (dUMP) į dTMP, naudodama 5,10-metilen-THF kaip vienos anglies donorą.

Purino sintezė: ir trečiasis purino sintezės etapas, katalizuojamas glicinamido ribonukleotido (GAR) transformilazės (EC2.1.2.2), ir priešpaskutinis etapas, kurį katalizuoja bifunkcinis purino biosintezės baltymas (fosforibozilaminoimidazolo karboksamido formiltransferazė),.1.,.2. naudoti 10-formil-THF kaip vienos anglies donorą.

Aminorūgščių metabolizmas: Homocisteinas yra remetilinamas į metioniną 5-metiltetrahidrofolato homocisteinu S-metiltransferazė (EC2.1.1.13), citoplazminis fermentas su kovalentiniu ryšiu surištu metilkobalaminu. Homocisteino remetilinimas paverčia 5-metil-THF kosubstratą atgal į THF ir vėl tampa prieinama kitoms reakcijoms. Metionino metabolitas S-adenozil-metioninas yra pagrindinis metilo grupės donoras DNR metilinimui ir daugelio esminių junginių, įskaitant katecholaminus, karnitiną, choliną, melatoniną ir kreatiną, sintezei.

Glicino hidroksimetiltransferazė (EC2.1.2.1), citozolinė ir mitochondrinė, metilina gliciną į seriną arba katalizuoja atvirkštinę reakciją. Paskutinį l-histidino pavertimo l-glutamatu etapą katalizuoja nuo PLP priklausomas fermentas glutamato formiminotransferazė (EC2.1.2.5). Metabolitas, susidaręs šios reakcijos metu ir išsiskiriantis su šlapimu reaguojant į histidino kiekį, formiminoglutamatas (FIGLU), praeityje buvo naudojamas kaip folio rūgšties trūkumo žymuo.

Formatų panaudojimas: cholino metabolizmas sukuria formaldehidą paskutiniuose dviejuose oksidacijos etapuose. Formaldehidas gali neenzimiškai reaguoti su THF ir ATP, kad susidarytų 10-formil-THF (10.31 pav.) arba jis paverčiamas formiatu NAD reikalaujančioje reakcijoje, kurią katalizuoja nuo glutationo priklausoma formaldehido dehidrogenazė (EC1.2.1.l, identiška alkoholio dehidrogenazės klasei). III chi grandinė, yra cinko). Svarbus formiato šaltinis yra formiltetrahidrofolato dehidrogenazės (EC1.5.1.6) neoksidacinis išsiskyrimas iš 10-formil-THF. Pagrindinė šios dehidrogenazės veikla yra formilo grupės oksidacinis atpalaidavimas iš 10-formil-THF vykstant NADPH generavimo reakcijai. Formiltetrahidrofolato dehidrogenazės sudėtyje yra pentaglutamil-THF kaip glaudžiai surišto nekatalizinio kofaktoriaus. Formiato kiekiai, susidarantys dėl metanolio metabolizmo, paprastai yra maži, tačiau gali būti reikšmingi esant dideliam maisto ar pramoniniam poveikiui (Bouchard ir kt., 2001). Formiatas pereina į citozolį, kur formiato-THF ligazė (EC6.3.4.3, trifunkcinio baltymo C1-THF sintazės aktyvumas, MTHFD1) gali susieti jį su THF nuo ATP priklausomoje reakcijoje. Alternatyvus formiatą šalinantis fermentas yra formiato-dihidrofolato ligazė (EC6.3.4.17). Šis nuo magnio priklausomas citozolinis fermentas sujungia formiatą su dihidrofolatu nuo ATP priklausomoje reakcijoje. Tada 10-formilo dihidrofolatas gali būti naudojamas fosforibozilaminoimidazolo karboksamido formiltransferaze (AICAR transformilaze, EC2.1.2.3), kad būtų gautas 5-formarnido-l-(5-fosfo-d-ribozil)imidazol-4-karboksarnidas), (formil-AICAR) purinų sintezės pirmtakas. Kai kurie 10-formil-dihidrofolatai gali neenzimiškai oksiduotis iki aklavietės produkto 10-formil-folato (Baggott ir kt., 2001).

Formiatas taip pat yra produktas, išsiskiriantis branduolyje dėl DNR demetilinimo, todėl jį reikia detoksikuoti lokaliai paverčiant 10-formil-THF.

Cirkadinis ritmas: kriptochromas 1 ir kriptochromas 2 yra mitochondrijų baltymai, kurie, atrodo, veikia kaip fotoreceptoriai, padedantys išlaikyti cirkadinio periodo ilgį ir ritmiškumą, kaip kofaktorius jie naudoja FAD ir folio rūgštį (Sancar, 2000).

Vaisiaus vystymasis: Nepakankamas folio rūgšties kiekis pirmosiomis nėštumo savaitėmis padidina NTL, gomurio skilimo (Martinelli ir kt., 2001), įgimtų širdies ligų (Kapusta ir kt., 1999) ir kitų organų apsigimimų riziką. Tikslūs priežastiniai mechanizmai vis dar nėra gerai suprantami. Yra žinoma arba įtariama, kad kelių genų produktų, dalyvaujančių folio rūgšties metabolizme, mažiau aktyvios formos padidina NTD riziką, įskaitant metileno THF reduktazę (EC1.5.1.20 Rosenberg ir kt., 2002), pteroilpoli-gama-glutamato karboksipeptidazę (EC3.4.17.21). Devlin ir kt., 2000), metilentetrahidrofolato-dehidrogenazės (MTHFD, C1-THF sintazės, Hal ir kt., 1998) ir RFC1 (De Marco ir kt., 2001). Placentos atsiskyrimo ir nėštumo nesėkmės rizika taip pat gali būti iš dalies susijusi su nepakankamu folio rūgšties prieinamumu (Eskes, 2001).

Folio rūgšties sintezė mikroorganizmuose: Sulfa vaistai slopina para-aminobenzenkarboksirūgšties (pABA) konjugaciją su pterinu bakterijose. Kadangi žmonės negali susintetinti folio rūgšties per šią reakciją, jų slopinimas neveikia (10.32 pav.).

10.32 pav. Formatų detoksikacijai reikia THF ir kaip kosubstrato, ir kaip glaudžiai surišto fermento kofaktoriaus.


Abstraktus

dUTP pirofosfatazė katalizuoja deoksiuridino trifosfato (dUTP) hidrolizę į deoksiuridino monofosfatą (dUMP) ir neorganinį pirofosfatą (PPi). DUTP pašalinimas yra gyvybiškai svarbus, nes jo netinkamas įtraukimas į DNR DNR polimerazėmis gali inicijuoti žalingą iteracinį atstatymo ir neteisingo įsisavinimo ciklą, dėl kurio gali įvykti DNR fragmentacija ir ląstelių mirtis. Manoma, kad folio agonistų ir timidilato sintazės inhibitorių priešnavikinis aktyvumas priklauso nuo klaidingo dUTP įsisavinimo. Be to, retrovirusinė cDNR gamyba gali būti ypač jautri netinkamo dUTP inkorporavimo poveikiui dėl atvirkštinės transkriptazės, linkusios į klaidas. Todėl dUTPazės aktyvumas yra idealus intervencijos taškas tiek chemoterapijoje, tiek antiretrovirusinėje terapijoje. Visų pirma, buvo pasiūlyta, kad žmogaus endogeninio retroviruso (HERV-K) koduojama dUTPazė papildo ŽIV infekciją ir todėl yra patrauklus specifinio slopinimo tikslas. Taigi, mes panaudojome vietos fotoafiniteto ženklinimą, nukreiptą mutagenezę ir molekulinį modeliavimą, kad priskirtume katalizinius vaidmenis konservuotoms aminorūgščių liekanoms aktyvioje HERV-K dUTPazės vietoje ir nustatytų struktūrinius skirtumus su kitais dUTPazės fermentais. Mes nustatėme, kad dUTP fotoafiniteto žymėjimas buvo specifinis β-plaukų segtuko motyvui HERV-K dUTPazėje. Aspartato liekanų Asp84 ir 86 mutagenezė į asparaginą šiame β-plaukų segtuke parodė, kad abiejų liekanų karboksilato dalis buvo reikalinga katalizei, bet ne dUTP surišimui. Padidėjęs pKaabiejų aspartato liekanų, atsiradusių pakeitus serino liekaną glutamato likučiais, esančiais šalia aspartato liekanų, aktyvumas padidėjo 1,67, kai pH yra 8,0, todėl fermento katalizinis mechanizmas yra bendra bazinė katalizė. Konservatyvi Tyr87 mutagenezė į Phe sumažino dUTPazės aktyvumą septynis kartus ir 3,3 karto sumažino prisijungimo aktyvumą, o pakeitimas izoleucino liekana visiškai panaikino ir katalizinį aktyvumą, ir dUTP surišimą, o tai rodo, kad prisijungimas / aktyvumas priklauso nuo aromatinės pusės. - grandinėlė plaukų segtuko apačioje. Palyginus homologija pagrįstą trimatį HERV-K dUTPazės modelio struktūrą su žmogaus dUTPazės kristalografine struktūra, paaiškėjo, kad HERV-K fermente yra konservuota α-spiralė, dėl kurios plečiasi HERV-K aktyvioji vieta. Šis išsiplėtimas gali būti atsakingas už HERV-K fermento gebėjimą hidrolizuoti dTTP ir surišti didesnius dNTP, priešingai nei dauguma dUTPazių, kurios yra labai specifinės dUTP. Žinios apie dUTPazės katalizinį mechanizmą ir išskirtinę HERV-K aktyviosios vietos topografiją suteikia molekulinį pagrindą kuriant specifinius HERV-K dUTPazės inhibitorius.


Klaidingas dUTP įtraukimas į DNR? – Biologija

Žmogaus limfoidinių ląstelių linija buvo ištirta dėl dUMP buvimo DNR su arba be gydymo dihidrofolato reduktazės inhibitoriumi metotreksatu. Ląstelėse, apdorotose metotreksatu ir pažymėtose [ 3 H]dUrd, buvo dUMP DNR lengvai aptinkamais kiekiais (≈0,8 pmol dUMP vienam μmol bendro DNR nukleotido), ir šis kiekis padidėjo ≈3 kartus, jei ląstelės taip pat buvo apdorotos Ura. Tuo pačiu metu. Šiais metodais nepavyko aptikti dUMP (<1 fmol/μmol DNR) DNR iš ląstelių, neapdorotų metotreksatu, neatsižvelgiant į tai, ar buvo Ura, ar jo nėra. dUMP buvimas DNR iš ląstelių, apdorotų metotreksatu, atsirado dėl didelio dUTP koncentracijos ląstelėje padidėjimo ir dTTP sumažėjimo, kuris lydi timidilato sintetazės (5,10-metilentetrahidrofolatas:dUMP C-metiltransferazė EC 2.1.1.45) slopinimą. pagal narkotikus. Šių pokyčių, matyt, pakanka įveikti įprastus mechanizmus, kurie pašalina dUMP iš DNR, o Ura sustiprinimas atspindi vieno iš mechanizmų – Ura pašalinimo iš DNR fermento Ura-DNR glikozilazės – slopinimą. Rezultatai rodo aktyvų DNR pažeidimą ląstelėse, kuriose slopinama timidilato sintetazė. Esant tokioms sąlygoms, atrodo, kad dUMP įterpiamas ir pašalinamas cikliškai, atsirandantis dėl dUMP pakartotinio įdėjimo taisant spragas Ura pašalinimo vietose. Ši įprasto ekscizijos ir atstatymo proceso pasekmė, kuri atsiranda, kai dUTP koncentracija ląstelėse artėja prie dTTP lygio, gali turėti poveikį, susijusį su vaistų timidilato sintetazės inhibitorių citotoksiškumu, klinikiniais folio rūgšties ir vitamino B-12 trūkumais ir mirtimi be timino. apskritai.


Antifolato sukeltas klaidingas deoksiuridino monofosfato įsisavinimas į DNR: didelės molekulinės masės DNR sintezės slopinimas žmogaus limfoblastoidinėse ląstelėse

In vitro žmogaus limfoblastoidinės ląstelės linijos (WIL-2) poveikis antifolatiniam metoprinui (DDMP), po kurio buvo pridėtas egzogeninis deoksiuridinas, ląstelėje susikaupė deoksiuridino trifosfatas (dUTP) ir deoksiuridino monofosfatas (dUMP) DNR. Kai naujai susintetinta DNR buvo išskirta iš DDMP apdorotų ląstelių, kurios buvo pažymėtos deoksiuridinu iki 3 minučių, dauguma susintetintos DNR buvo ne didesnės kaip 4 S šarminės sacharozės gradientuose. Priešingai, vyraujanti naujai susintetintos šarminės DNR forma vaistu neapdorotose ląstelėse buvo didesnė nei 4 S. Nenormalus DNR sintezės progresas, naujai susintetintos DNR degradacija arba abu atsirado kaip uždelsta gydymo DDMP pasekmė, kai nebuvo. egzogeninio dezoksiuridino, kai timidinas buvo naudojamas DDMP apdorotai DNR žymėti, stabilumas antifolatų sukelto netinkamo dUMP įsiskverbimo į DNR nebuvo išaiškintas, buvo aišku, kad antifolatai gali tiesiogiai sutrikdyti vaistais apdorotos DNR sintezės kokybę ir kiekį. ląstelės.


Prieigos parinktys

Gaukite visą žurnalo prieigą 1 metams

Visos kainos nurodytos NET.
PVM bus pridėtas vėliau kasoje.
Mokesčių apskaičiavimas bus baigtas apmokėjimo metu.

Gaukite ribotą laiką arba visą straipsnių prieigą „ReadCube“.

Visos kainos nurodytos NET.


Metotreksato sukeltas neteisingas uracilo įsisavinimas į DNR

Žmogaus limfoidinių ląstelių linija buvo ištirta dėl dUMP buvimo DNR su arba be gydymo dihidrofolato reduktazės inhibitoriumi metotreksatu. Ląstelėse, apdorotose metotreksatu ir pažymėtose [(3)H]dUrd, buvo dUMP DNR lengvai aptinkamais kiekiais (maždaug 0,8 pmol dUMP vienam mumoliui bendro DNR nukleotido), ir šis kiekis padidėjo maždaug 3 kartus, jei ląstelės taip pat buvo apdorotos. su Ura tuo pačiu metu. Šiais metodais nepavyko aptikti dUMP (<1 fmol/mumol DNR) DNR iš ląstelių, neapdorotų metotreksatu, neatsižvelgiant į tai, ar buvo Ura, ar jo nėra. dUMP buvimas DNR iš ląstelių, apdorotų metotreksatu, atsirado dėl didelio dUTP koncentracijos ląstelėje padidėjimo ir dTTP sumažėjimo, kuris lydi timidilato sintetazės (5,10-metilentetrahidrofolatas:dUMP C-metiltransferazė EC 2.1.1.45) slopinimą. pagal narkotikus. Šių pokyčių, matyt, pakanka įveikti įprastus mechanizmus, kurie pašalina dUMP iš DNR, o Ura sustiprinimas atspindi vieno iš mechanizmų – Ura pašalinimo iš DNR fermento Ura-DNR glikozilazės – slopinimą. Rezultatai rodo aktyvų DNR pažeidimą ląstelėse, kuriose slopinama timidilato sintetazė. Esant tokioms sąlygoms, atrodo, kad dUMP įterpiamas ir pašalinamas cikliškai, atsirandantis dėl dUMP pakartotinio įdėjimo taisant spragas Ura pašalinimo vietose. Ši įprasto ekscizijos ir atstatymo proceso pasekmė, kuri atsiranda, kai dUTP lygis ląstelėse artėja prie dTTP lygio, gali turėti poveikį, susijusį su vaistų timidilato sintetazės inhibitorių citotoksiškumu, klinikiniais folio rūgšties ir vitamino B-12 trūkumais ir mirtimi be timino. apskritai.


Metotreksato sukeltas neteisingas uracilo įsisavinimas į DNR

Žmogaus limfoidinių ląstelių linija buvo ištirta dėl dUMP buvimo DNR su arba be gydymo dihidrofolato reduktazės inhibitoriumi metotreksatu. Ląstelėse, apdorotose metotreksatu ir pažymėtose [3H]dUrd, buvo dUMP DNR lengvai aptinkamais kiekiais (≈0,8 pmol dUMP vienam μmol viso DNR nukleotido), ir šis kiekis padidėjo ≈3 kartus, jei ląstelės taip pat buvo apdorotos Ura. Tuo pačiu metu. Šiais metodais nepavyko aptikti dUMP (<1 fmol/μmol DNR) DNR iš ląstelių, neapdorotų metotreksatu, neatsižvelgiant į tai, ar buvo Ura, ar jo nėra. dUMP buvimas DNR iš ląstelių, apdorotų metotreksatu, yra labai padidėjusios dUTP koncentracijos ląstelėje ir dTTP sumažėjimo rezultatas, o tai lydi timidilato sintetazės (5,10-metilentetrahidrofolatas:dUMP) slopinimas. C-metiltransferazė EC 2.1.1.45), kurią sukelia vaistas. Šių pokyčių, matyt, pakanka įveikti įprastus mechanizmus, kurie pašalina dUMP iš DNR, o Ura sustiprinimas atspindi vieno iš mechanizmų – Ura pašalinimo iš DNR fermento Ura-DNR glikozilazės – slopinimą. Rezultatai rodo aktyvų DNR pažeidimą ląstelėse, kuriose slopinama timidilato sintetazė. Esant tokioms sąlygoms, atrodo, kad dUMP įterpiamas ir pašalinamas cikliškai, atsirandantis dėl dUMP pakartotinio įdėjimo taisant spragas Ura pašalinimo vietose. Ši įprasto ekscizijos ir atstatymo proceso pasekmė, kuri atsiranda, kai dUTP lygis ląstelėse artėja prie dTTP lygio, gali turėti poveikį, susijusį su vaistų timidilato sintetazės inhibitorių citotoksiškumu, klinikiniais folio rūgšties ir vitamino B-12 trūkumais ir mirtimi be timino. apskritai.


Gilbert, W. RNR pasaulis. Gamta 319, 618 (1986).

Poole, A., Penny, D. ir Sjöberg, B.-M. Metil-RNR: evoliucinis tiltas tarp RNR ir DNR? Chem. Biol. 7, R207–R216 (2000).

Hitzeman, R. A. ir Price, A. R. Ryšys su Bacillus subtilis DNR polimerazė III į bakteriofago PBS2 sukeltą DNR polimerazę ir uracilo turinčios DNR replikaciją. J. Virolis. 28, 697–709 (1978).

Lazcano, A., Guerrero, R., Margulis, L. & Oró, J. Evoliucinis perėjimas iš RNR į DNR ankstyvosiose ląstelėse. J. Mol. Evol. 27, 283–290 (1988).

Sutherland, J. D. ir Whitfield, J. N. Prebiotinė chemija: bioorganinė perspektyva. Tetraedras 53, 11493–11527 (1997).

Frederico, L. A., Kunkel, T. A. ir Ramsay Shaw, B. Jautrus genetinis tyrimas citozino deaminacijai aptikti: greičio konstantų ir aktyvavimo energijos nustatymas. Biochemija 29, 2532–2537 (1990).

Frederico, L. A., Kunkel, T. A. ir Ramsay Shaw, B. Citozino deaminacija nesuderintose bazių porose. Biochemija 32, 6523–6530 (1993).

Dianov, G. & Lindahl, T. DNR bazės ekscizijos-remonto kelio atkūrimas. Curr. Biol. 4, 1069–1076 (1994).

Lindahl, T. & Wood, R. D. Kokybės kontrolė taikant DNR taisymą. Mokslas 286, 1897–1905 (1999).

Mosbaugh, D. W. ir Bennett, S. E. Uracilo ekscizijos DNR taisymas. Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol. 48, 315–370 (1994).

Krokan, H. E., Standal, R. & Slupphaug, G. DNR glikozilazės DNR bazės ekscizijos taisyme. Biochem. J. 325, 1–16 (1997).

Cunningham, R. P. DNR glikozilazės. Mutat. Res. 383, 189–196 (1997).

Kornbergas, A. ir Bakeris, T. A. DNR replikacija 2-asis etn Ch. 2 (W. H. Freeman, Niujorkas, 1992).

Jacob, F. Evoliucija ir tinkavimas. Mokslas 196, 1161–1166 (1977).

Jones, P.A. DNR metilinimo paradoksas. Tendencijos Genet. 15, 34–37 (1999).

Barrett, T. E. ir kt. G: T/U neatitikimui specifinės DNR glikozilazės kristalinė struktūra: neatitikimo atpažinimas pagal komplementariosios grandinės sąveiką. Ląstelė 92, 117–129 (1998).

Gallinari, P. & amp Jiricny, J. Nauja uracilo-DNR glikozilazių klasė, susijusi su žmogaus timino-DNR glikozilaze. Gamta 383, 735–738 (1996).

Barrett, T. E. ir kt. Sužlugdyto glikozilazės DNR taisymo komplekso kristalinė struktūra. EMBO J. 18, 6599–6609 (1999).

Panayotou, G., Brown, T., Barlow, T., Pearl, L. H. ir Savva, R. Tiesioginis uracilo-DNR glikozilazės substrato pasirinkimo matavimas. J. Biol. Chem. 273, 45–50 (1998).

Lindahl, T. Pirminės DNR struktūros nestabilumas ir irimas. Gamta 362, 709–715 (1993).

Lutsenko, E. ir Bhagwat, A. S. Pagrindinės citozino ir timino mutacijų citozino metilinimo vietose augančiose ląstelėse priežastys. Modelis, jo eksperimentinė parama ir pasekmės. Mutat. Res. 437, 11–20 (1999).

Lutsenko, E. & Bhagwat A. S. The role of the Escherichia coli MUG baltymas pašalina uracilą ir 3,N 4 -Etenocitozinas iš DNR. J. Biol. Chem. 274, 31034–31038 (1999).

Maniloff, J. ir Ackermann, H.-W. Bakterinių virusų taksonomija: uodeginių virusų genčių ir Caudovirales būrio sukūrimas. Arch. Virol. 143, 2051–2063 (1998).

Hendrix, R. W., Smith, M. C. M., Burns, R. N., Ford, M. E. ir Hatfull, G. F. Evoliuciniai ryšiai tarp įvairių bakteriofagų ir profagų: visas pasaulis yra fagas. Proc. Natl Akad. Sci. JAV 96, 2192–2197 (1999).

Hendrich, B., Hardeland, U., Ng, H.-H., Jiricny, J. & amp Bird, A. Timino glikozilazė MBD4 gali prisijungti prie deaminacijos produkto metilintose CpG vietose. Gamta 401, 301–304 (1999).

Yoder, J. A., Walsh, C. P. & amp Bestor, T. H. Citozino metilinimas ir intragenominių parazitų ekologija. Tendencijos Genet. 13, 335–340 (1997).

O'Neill, R. J. W., O'Neill, M. J. ir Graves, J. A. M. Nepakankamas metilinimas, susijęs su retroelementų aktyvavimu ir chromosomų remodeliavimu tarprūšiniame žinduolių hibride. Gamta 393, 68–72 (1998).

Walsh, C. P., Chaillet, J. R. & amp Bestor, T. H. IAP endogeninių retrovirusų transkripciją riboja citozino metilinimas. Gamta Genet. 20, 116–117 (1998).

Garrick, D., Fiering, S., Martin, D. I. K. & Whitelaw, E. Pakartokite sukeltą genų nutildymą žinduoliuose. Gamta Genet. 18, 56–59 (1998).

Regev, A., Lamb, M. J. & Jablonka, E. DNR metilinimo vaidmuo bestuburiuose: vystymosi reguliavimas ar genomo apsauga? Mol. Biol. Evol. 15, 880–891 (1998).

Simmen, M. W. ir kt. Nemetilinti perkeliami elementai ir metilinti genai chordato genome. Mokslas 283, 1164–1167 (1999).

Lieb, M. ir Bhagwat, A. S. Labai trumpas pleistro taisymas: sumažinamos citozino metilinimo išlaidos. Mol. Microbiol. 20, 467–473 (1996).

Tsutakawa, S. E., Jingami, H. & Morikawa, K. TG neatitikimo atpažinimas: labai trumpo pataisymo endonukleazės kristalinė struktūra komplekse su DNR dupleksu. Ląstelė 99, 615–623 (1999).

Adamsas, M. A. ir kt. Genomo seka Drosophila melanogaster. Mokslas 287, 2185–2195 (2000).

Tweedie, S. ir kt. DNR metilinimo sistemos pėdsakai Drosophila melanogaster? Gamta Genet. 23, 389–390 (1999).

Shapiro, R. Prebiotinė citozino sintezė: kritinė analizė ir pasekmės gyvybės kilmei. Proc. Natl Akad. Sci. JAV 96, 4396–4401 (1999).

Crick, F. H. C. Genetinio kodo kilmė. J. Mol. Biol. 38, 367–379 (1968).

El-Hajj, H. H., Wang, L. ir Weiss, B. Keli mutantai Escherichia coli riboto augimo metu sintetinant praktiškai betimino DNR. J. Bakteriolis. 174, 4450–4456 (1992).

Garcia, G. A. ir Goodenough-Lashua, D. M. in RNR modifikavimas ir redagavimas (sud. Grosjean, H. ir Benne, R.) 135–168 (ASM, Vašingtonas, 1998).

El-Hajj, H. H., Zhang, H. ir Weiss, B. Dut (dezoksiuridino trifosfatazės) mutacijos mirtingumas Escherichia coli. J. Bakteriolis. 170, 1069–1075 (1988).


SANTRAUKA

Fonas: 5-fluorouracilo (5-FU) veikimo mechanizmas buvo susijęs su timidilato sintazės (TS) slopinimu ir 5-FU įsijungimu į RNR ir DNR, tačiau duomenų apie pastarąjį žmogaus naviko audinį yra nedaug. Todėl mes matavome įtraukimą į žmogaus naviko biopsijos mėginius po to, kai buvo sušvirkšta vien tik 5-FU arba su leukovorinu.

Pacientai ir metodai: Pacientai gavo 5-FU (500 mg/m 2 ) su didelėmis leukovorino dozėmis, mažomis leukovorino arba l-leukovorino dozėmis arba be jų, o biopsijos mėginiai buvo paimti maždaug po 2, 24 arba 48 val. Audiniai buvo susmulkinti ir ekstrahuoti nukleino rūgštims. 5-FU įtraukimas buvo matuojamas naudojant dujų chromatografiją / masės spektrometriją po visiško skilimo iki izoliuotų RNR ir DNR bazių.

Rezultatai: Didžiausias įtraukimas į RNR (1,0 pmol/μg RNR) ir DNR (127 fmol/μg DNR) atitinkamai iš 59 ir 46 biopsijos mėginių buvo nustatytas praėjus 24 valandoms po 5-FU vartojimo. Įtraukimas į RNR, bet ne į DNR, reikšmingai koreliavo su intratumoriniu 5-FU lygiu. Tačiau DNR įtraukimas buvo reikšmingai koreliuojamas su RNR įtraukimu. Pirminis naviko audinys, kepenų metastazės ir normali gleivinė reikšmingų skirtumų neparodė, o leukovorinas neturėjo jokio poveikio. Nei RNR (30 pacientų), nei DNR (24 pacientai) įtraukimas nebuvo reikšmingas ryšys su atsaku į gydymą 5-FU. Tačiau toje pačioje pacientų grupėje atsakas buvo reikšmingai koreliuojamas su TS slopinimu (vidutinis TS reaguojančiose ir nereaguojančiose grupėse atitinkamai 45 ir 231 pmol/h/mg baltymo P=0.001).

Išvados: 5-FU yra įtraukiamas aptinkamais kiekiais į žmogaus naviko audinio RNR ir DNR, tačiau, priešingai nei TS, ryšio tarp gydymo 5-FU ir įtraukimo veiksmingumo nenustatyta.


Padidėjęs uracilo įsiskverbimas į limfocitus iš žiurkių, kuriems trūksta folio rūgšties

Tam tikrų žmogaus vėžio formų išsivystymas buvo susijęs su nepakankamu folatų vartojimu. Buvo nustatytas folatų trūkumo in vivo poveikis DNR stabilumui (sruogų nutrūkimas, netinkamai susijungusio uracilo ir oksidacinės bazės pažeidimas) limfocituose, išskirtuose iš žiurkių, šeriamų maistu, kuriame trūksta folio rūgšties. Kadangi folio rūgšties ir kitų metilo donorų metabolizmo keliai yra glaudžiai susiję, buvo nustatytas metionino ir cholino trūkumo poveikis atskirai arba kartu su folio rūgšties trūkumu. Šeriant Hooded Lister žiurkių patinus 10 savaičių dieta be folio rūgšties, susidarė vidutinio sunkumo folio trūkumas (25�% (apytiksliai) sumažėjo folio koncentracija plazmoje, eritrocituose ir kepenyse (P < – 0,05) #x00025 homocisteino padidėjimas plazmoje (P < 0,05)). Limfocitų DNR grandinės lūžis iš eilės padidėjo visose grupėse po 4 savaičių ir 8 savaičių dietos (50�% (apytiksliai) po 8 savaičių). Tik mažas folio rūgšties kiekis specifiškai ir palaipsniui sukėlė netinkamą uracilo įsisavinimą viso tyrimo metu (100% (apytiksliai) po 8 savaičių). Nei folio trūkumas, nei cholino / metionino trūkumas nepakeitė oksidacinio DNR bazės pažeidimo. Apibendrinant galima teigti, kad vidutinio sunkumo folatų trūkumas in vivo yra susijęs su DNR stabilumo sumažėjimu, matuojant padidėjusį DNR grandinės lūžimą ir netinkamai įtrauktą uracilą. © 2000 m. vėžio tyrimų kampanija http://www.bjcancer.com