Informacija

6.8.3: Mikrobų masės matavimai – biologija

6.8.3: Mikrobų masės matavimai – biologija


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

MOKYMOSI TIKSLAI

  • Prisiminkite mikrobų masės matavimo būdus

Bakterijų augimas vyksta trimis etapais: vėlavimo fazė, log fazė ir nejudančioji fazė. Eksponentinio bakterijų augimo kreivės matavimas paketinėje kultūroje tradiciškai buvo visų mikrobiologų mokymo dalis; pagrindinė priemonė reikalauja bakterijų skaičiavimo (ląstelių skaičiavimo) tiesiogiai ir individualiai (mikroskopinė, tėkmės citometrija), tiesioginiu ir masiniu (biomasė), netiesioginiu ir individualiu (kolonijų skaičiavimas) arba netiesioginiu ir masiniu (labiausiai tikėtinas skaičius, drumstumas, maistinių medžiagų pasisavinimas) metodus. Modeliai suderina teoriją su matavimais.

MATAVIMO METODAI

Yra keletas ląstelių masės matavimo metodų, įskaitant gravimetrasmetodas kuri naudoja įprastas svarstykles mėginiui pasverti (sausas svoris/ml) po to, kai pašalinamas vanduo.

Netiesioginis ląstelių masės apskaičiavimo metodas yra drumstimimetrija. Ląstelių kultūros yra drumstos: jos sugeria dalį šviesos, o likusią dalį praleidžia. Kuo didesnė ląstelių koncentracija, tuo didesnis drumstumas. Spektrofotometrai yra elektriniai prietaisai, galintys labai tiksliai matuoti drumstumą. Kultūra dedama į permatomą kiuvetę; kiuvetė dedama į aparatą ir iš karto matuojamas drumstumas. Paprastos matematinės formulės padeda aptiktą drumstumą konvertuoti į ląstelių koncentraciją. Spektrofotometrijos naudojimas kultūrų drumstumui matuoti žinomas kaip turbidometrija. Atkreipkite dėmesį į rašybos skirtumą: drumstimimetrija ir turbidometrija nėra tas pats žodis.

Spektrofotometrijoje kultūros paprastai skiesti nereikia, nors viršijant tam tikrą ląstelių tankį, rezultatai praranda patikimumą. Iš visų elementų skaičiavimui naudojamų elektros prietaisų pigiausias yra spektrofotometras, o jo veikimas greičiausias ir aiškiausias. Dėl to spektrofotometrija tapo pasirinktu metodu greitam bakterijų augimo ir susijusių programų matavimui. Yra spektrofotometrai, į kuriuos vienu metu galima įdėti kelias kiuvetes, dar labiau sutrumpinant darbo laiką. Be to, yra spektrofotometrų, kuriems reikia labai mažo kultūros tūrio, vos 1 mikrolitro. Tai kartu su stochastiniu skystų kultūrų pobūdžiu leidžia tik įvertinti ląstelių skaičių.

Papildomas mikrobų masės matavimo metodas yra ląstelių kiekybinis nustatymas kultūroje ląstelių padengimas Petri lėkštelėje. Jei ląstelės yra efektyviai paskirstytos lėkštelėje, paprastai galima daryti prielaidą, kad kiekviena ląstelė sudarys vieną koloniją. Tada galima suskaičiuoti kolonijas ir, remiantis žinomu kultūros tūriu, kuris buvo paskleistas ant plokštelės, galima apskaičiuoti ląstelių koncentraciją.

Kaip ir su skaičiavimo kameromis, kultūros paprastai turi būti stipriai atskiestos prieš dedant; kitu atveju vietoj pavienių kolonijų, kurias galima suskaičiuoti, susidarys vadinamoji „veja“, dėl kurios viena ant kitos gulės tūkstančiai kolonijų. Be to, padengimas yra lėčiausias būdas: daugumai mikroorganizmų reikia mažiausiai 12 valandų, kad susidarytų matomos kolonijos.

Pagrindiniai klausimai

  • Apskaičiuojant sauso mėginio masę galima apskaičiuoti ląstelių skaičių, tačiau jautrumas apsiriboja mėginiais, kuriuose yra daugiau nei 10E8 bakterijų viename mililitre.
  • Spektrofotometrija yra netiesioginis ląstelių koncentracijos skaičiavimo metodas, matuojant drumstumo pokyčius.
  • Bakterijas taip pat galima skaičiuoti naudojant plokštelės metodą, kuris pagrįstas kolonijų, susidariusių Petri lėkštelėse, kuriose yra specifinės auginimo terpės, skaičiumi.

Pagrindinės sąlygos

  • spektrofotometrija: Spektrofotometras dažniausiai naudojamas tirpalų pralaidumui arba atspindžiui matuoti. Tačiau jie taip pat gali būti suprojektuoti taip, kad būtų galima išmatuoti difuziją bet kuriame iš išvardytų šviesos diapazonų, kurie paprastai apima apie 200 nm – 2500 nm, naudojant skirtingus valdiklius ir kalibravimus. [2] Šiuose šviesos diapazonuose mašiną reikia kalibruoti naudojant standartus, kurių tipas skiriasi priklausomai nuo fotometrinio nustatymo bangos ilgio. [3]
  • srauto citometrija: metodas, naudojamas rūšiuoti ir klasifikuoti ląsteles naudojant fluorescencinius žymenis ant jų paviršiaus.
  • gravimetras: Prietaisas, naudojamas vietiniams gravitacinio lauko pokyčiams matuoti


Žiūrėti video įrašą: The Periodic Table Song. SCIENCE SONGS (Sausis 2023).